AO/PI双染试剂盒

特别提示：包括AO/PI双染试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：AO/PI双染试剂盒
产品规格：100T

AO/PI 双染细胞凋亡检测试剂盒是采用DNA探针双染细胞核的方法检测细胞的状态。吖啶橙(Acridine Orange，AO)为一种荧光染料，该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色。其激发波长为488nm，吸收波长为515nm。它与细胞中DNA和RNA 结合量存在差别,复合物可发出不同颜色的荧光，红色荧光为AO-DNA(F>600nm),绿色荧光为AO-RNA或单链DNA(F>530nm)。
在荧光显微镜下观察，吖啶橙可透过正常细胞膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等的片断，形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光，或黄绿色碎片颗粒；而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
Propidium Iodide是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。

储存条件：染色液2-8℃避光保存。试剂C 2-8℃保存。
【注】
●长期不用可以-20℃保存。
●染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
有效期：六个月。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。
检测方法：
流式细胞仪
荧光显微镜
激光共聚焦
样本类型：
● 悬浮细胞
● 贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器及吸头 ● PBS或HBSS ●荧光显微镜或流式细胞仪或激光共聚焦 ●离心机及离心管
使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●本染色试剂盒可用于细胞、细胞涂片等。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，其他方法请参阅相关资料。
● 贴壁细胞可以消化下来染色，也可以直接原位染色。

使用方法：
1．染色缓冲液的配制：
根据样品数按下列比例配制染色缓冲液。取100μL试剂C 加900μL无菌去离子水稀释，混匀即成染色缓冲液。
2．收集样本细胞，细胞数量在 10×105个以内。
3．用 PBS 洗涤细胞两次。
4．用 500μL染色缓冲液将细胞重悬。
5．加入 5μl AO染色液。
6．加入10μl PI染色液。
7．轻轻混匀后4℃避光孵育10-20分钟。
8．用 PBS 洗涤细胞。
9．用荧光显微镜或流式细胞仪检测结果。

结果分析：
在荧光显微镜下，选用488nm 激发光镜检：
AO染色正常细胞DNA呈均匀黄色或黄绿色，形态结构正常。
当细胞凋亡时，染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不一、致密浓染。
坏死细胞呈强红色荧光。