PC-3 细胞株

CRISPR编辑细胞株如何验证

拿到一株"敲除细胞株"，怎么判断它是不是真的合格？很多人在这一步只做一次 Western，看到条带变浅就认为成功了，等到投稿时才发现问题。 先说结论：验收要分四层——基因型（扩增子 NGS 确认双等位移码、无野生型 reads）、转录本（RT-qPCR 确认 mRNA 下降且排除 NMD 逃逸）、蛋白（Western 确认完全缺失、注意表位与半衰期）、功能（表型实验在两个独立克隆上重现）。此外还要检查细胞株的基础质量（支原体、身份鉴定、代次）。四层只做其中一层，都可能漏掉严重问题

稳定细胞株怎么验证？

辛苦几周筛出来的稳转株，交付或使用前最后一个问题： 稳定细胞株怎么验证？验证哪些指标、用什么方法、做到什么程度才算"合格"？ 先说结论： 稳转株验证分三层：分子层面（qPCR/WB 确认表达或敲低、编辑类加 PCR 测序基因型确认）、细胞层面（支原体、活力、生长状态）、功能层面（表型实验与预期一致）。三层都过，细胞株才能放心用、放心传、放心写进论文。 验证顺序建议： 分子验证 → 细胞质检 → 冻存复苏复检 → （编辑类）基因型确认 → 功能验证 --- 一、分子层面：表达/编辑效果验证

细胞株 cell strain

　　 广义的是指连续继代的细胞系。一如海拉细胞（ HeLa cell）株那样，已成为习惯的用法；所谓“株”，是意味着培养细胞获得无限性的增殖，形成连续继代的细胞系。然而正确地来说，是指由选择或纯系化所分离的具有特异性态或遗传标记的培养细胞系。在这个定义下，当记载细胞株时，如胸苷激酶缺失 L细胞株那样，而明确记载其特异性是必要的。