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文献和实验拿到一株"敲除细胞株"，怎么判断它是不是真的合格？很多人在这一步只做一次 Western，看到条带变浅就认为成功了，等到投稿时才发现问题。 先说结论：验收要分四层——基因型（扩增子 NGS 确认双等位移码、无野生型 reads）、转录本（RT-qPCR 确认 mRNA 下降且排除 NMD 逃逸）、蛋白（Western 确认完全缺失、注意表位与半衰期）、功能（表型实验在两个独立克隆上重现）。此外还要检查细胞株的基础质量（支原体、身份鉴定、代次）。四层只做其中一层，都可能漏掉严重问题
Raji是人Burkitt's淋巴瘤细胞，是 CAR-T、NK 细胞杀伤、B 细胞受体信号、补体依赖细胞毒及免疫炎症通路研究的经典悬浮工具细胞。细胞天然聚团、对血清、细胞密度和机械吹打均高度敏感，状态极易受环境、操作、血清质量影响，本文将针对Raji的细胞培养流程进行梳理和指导。 一、细胞复苏 1.【准备工作】水浴锅提前预热至 37℃；准备 9ml 培养基在37℃条件下预热；生物安全柜提前使用紫外照射 30min； 2.【融化】从液氮取出冻存管，37℃水浴快速摇晃融化，约 1-2
辛苦几周筛出来的稳转株，交付或使用前最后一个问题： 稳定细胞株怎么验证？验证哪些指标、用什么方法、做到什么程度才算"合格"？ 先说结论： 稳转株验证分三层：分子层面（qPCR/WB 确认表达或敲低、编辑类加 PCR 测序基因型确认）、细胞层面（支原体、活力、生长状态）、功能层面（表型实验与预期一致）。三层都过，细胞株才能放心用、放心传、放心写进论文。 验证顺序建议： 分子验证 → 细胞质检 → 冻存复苏复检 → （编辑类）基因型确认 → 功能验证 --- 一、分子层面：表达/编辑效果验证
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