水产动物基因组提取试剂盒

特别提示：包括水产动物基因组提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：水产动物基因组提取试剂盒
英文名称：Marine Animal DNA Extraction Kit
产品货号：WE0182
产品规格：50次

  本试剂盒适合于从多种水产动物(如鱼类、虾类、贝类等)组织中提取总DNA。纯化过程不需苯酚或氯仿等有机溶剂，无需乙醇沉淀。本试剂盒采用优化的缓冲体系使裂解液中的DNA高效特异的结合到硅胶质离心吸附柱上，其他污染物可流过膜，蛋白、PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步有效的洗涤步骤被有效去除，zuì后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。

试剂盒组成：

组份	50次
Buffer GTL	15ml
Buffer GL	15ml
Buffer GW1(浓缩液)	13ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml
Buffer GE	15ml
蛋白酶K	25mg
蛋白酶K 储存液	1.25ml
吸附柱DM及收集管	50套

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项：
1、向蛋白酶K 中加入1.25ml 蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GTL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，Buffer GTL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
5、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer GTL后加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225S。

不同水产动物组织提取得率：

样本	建议孵育时间	DNA得率
贝类组织	0.5 h	12-20μg
虾组织	1 h	8-14μg
鱼组织	1 h	15-40μg

操作步骤：
1、取不超过30 mg组织材料，液氮充分研磨后，放入离心管(自备)中，加入200μl Buffer GTL，涡旋振荡15秒。
注意：
1)根据提取的组织不同，起始量也有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20 mg。
2)如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl 100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
2、加入20μl 蛋白酶K ，涡旋混匀，简短离心，使管壁上的溶液收集到管底。56℃孵育，直至组织完全溶解，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：不同组织裂解时间不同，通常需0.5-2小时即可完成。对于难裂解组织可以适当延长孵育时间。
3、加入200μl Buffer GL，充分颠倒混匀，70℃孵育10分钟，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：加入Buffer GL时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA量少和提取出的DNA不纯。
4、加入200μl无水乙醇，充分颠倒混匀，此时可能出现絮状沉淀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
5、将步骤4所得到的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
8、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管中，向吸附柱中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-200μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤9所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤9；若洗脱体积小于200μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

我公司销售的水产动物基因组提取试剂盒质量上佳，价格普惠，欢迎广大新老客户踊跃订购。