- ￥1850
- Solarbio
- 北京
- BC4185
- 2025年07月13日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Shikimic acid Dehydrogenase(SD) Activity Assay Kit
- 库存：
999
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC4185-100T/96S
- 规格：
100管/96样
莽草酸脱氢酶（SD）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号: BC4185
规格: 100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液 | 液体100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂一 | 液体10 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂三 | 粉剂×1瓶 | -20℃保存 |
- 提取液：内含不溶物，用前摇匀。
- 试剂二：临用前加入5 mL蒸馏水溶解。
- 试剂三：临用前每瓶加入10 mL蒸馏水溶解。
- 工作液的配制：根据用量按照试剂一：试剂二：试剂三为7:4:8的体积比例充分混匀，备用，用前25℃预热15min。
莽草酸途径是存在于植物和微生物中的一条重要的代谢途径，莽草酸脱氢酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代谢途径中催化第四步反应的关键酶。
莽草酸脱氢酶催化莽草酸和NADP产生NADPH，检测340nm下的吸光值增加速率来表示SD活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96孔UV板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液（加入前摇匀））进行冰浴匀浆，然后，8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
2、细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3、液体：直接检测。
二、测定步骤
- 紫外分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，紫外分光光度计蒸馏水调零。
- 工作液25℃预热10min以上。
- 操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分别加入下列试剂：
| 试剂名称 | 空白管 | 测定管 |
| 工作液（µL） | 190 | 190 |
| 样本（µL） | 10 | |
| 蒸馏水（µL） | 10 | |
| 加入样本即开始计时，充分混匀后于340nm处测定20s时的吸光值A1和5min20s时的吸光值A2，计算ΔA测定管=A2测定-A1测定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。 | ||
A、按微量石英比色皿计算：
- 按蛋白浓度计算
SD酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×Cpr）÷T=643×ΔA÷Cpr
- 按样本质量计算
SD酶活（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T=643×ΔA÷W
- 按细胞数量计算
SD酶活（U/104 cell）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））÷T
=643×ΔA÷细胞数量（万个）
- 按液体体积计算
SD酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×109×V反总÷V样÷T=643×ΔA
ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，2×10-4L；V样：反应体系中样本体积，0.01mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g；T：反应时间，5min；109：单位换算系数，1mol=109nmol；V样总：加入提取液体积，1mL。
B、按96孔UV板计算：
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm（96孔板光径）进行计算即可。
注意事项：
- 样本提取上清液置于冰上待测，且样本提取完成后建议2h内测完。
- 样本的蛋白浓度需自行测定，由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约1 mg/mL），所以测定样本蛋白浓度时需扣除提取液自身蛋白浓度。
- ΔA大于1时，建议将样本稀释后再进行测定。当ΔA小于0.01时，可以延长反应时间（10min或15min）来测定。
- 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.01。
- 取0.1g稗草，加入1mL提取液，进行样本处理，取上清按照测得步骤操作，用微量石英比色皿测得计算ΔA测定管=A2测定-A1测定=0.2771-0.2433=0.0338，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA测定管-ΔA空白管=0.0338，按照样本质量计算得：SD酶活（U/g 质量）=643×ΔA÷W=217.334 U/g 质量。
BC2030/BC2035 异柠檬酸裂解酶（ICL）活性检测检测试剂盒
BC3170/BC3175 乙酸激酶（ACK）活性检测试剂盒
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文献和实验BC2030/BC2035 异柠檬酸裂解酶（ICL）活性检测检测试剂盒
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一、实验原理 细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。 其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法
一、MTT比色法检测细胞活性 （一）原理 活细胞内线粒体琥珀酸脱氢酶能催化无色的MTT形成蓝色的甲肷，其形成的量与活细胞数和功能状态呈正相关。对细胞活力有影响的表达蛋白活性检测可以通过MTT比色法进行。 （二）试剂准备 1、 青链霉素溶液（100X）：青霉素100万U，链霉素100万U，溶于100mlddH2O中, 抽滤除菌。 2、 L15基础培养基：1000mlL15培养基，加2g碳酸氢钠，10ml 100X青链霉素，5mlHEPES。 3、 MTT液：5mg/ml
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