超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒 微量法

超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0175
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液	液体110 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂一	液体5 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	液体100 μL×1支	2-8℃保存
试剂三	液体4 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂四	液体0.25mL×1支	2-8℃保存

溶液的配制：

1. 试剂二：使用前先使用掌上离心机离心至管底再吹打混匀；
2. 试剂二工作液：根据样本数量按试剂二：蒸馏水=30μL：270μL（共300μL，约15S）的比例配制试剂二工作液，现用现配；
3. 试剂四工作液：根据样本量按试剂四：蒸馏水=60μL：240μL（共300μL，约30T）的比例配制试剂四工作液，现用现配。

产品说明：
SOD（EC 1.15.1.1）是一种广泛存在于生物体内的金属酶，是重要的氧自由基清除剂，能催化超氧化物阴离子发生歧化作用，生成H₂O₂和O₂。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H₂O₂主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。
通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O₂^-)，O₂^-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除O₂^-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。血清或者SOD酶活小的样本更适合使用BC5165超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒（WST-1法）进行测定。


注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：

1. 样本和试剂二工作液使用时在冰上放置。
2. 样本较多时，可按表格配制测定管工作液和对照管工作液（包含试剂一、（试剂二工作液）、试剂三、蒸馏水），试剂四工作液必须最后加入。
3. 反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可。

实验实例：

1. 取0.1g大鼠肾脏加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清之后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定= A测定-A对照=0.566-0.138=0.428，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.802-0.041=0.761，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%=43.8%，按样本质量计算酶活得：

SOD活性（U/g 质量）=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W=77.94 U/g 质量。

1. 取0.1g稗草叶片加入1mL提取液进行匀浆研磨，取上清用蒸馏水稀释4倍后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定= A测定-A对照=0.498-0.078=0.42，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.771-0.042=0.729，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%=42.4%，按样本质量计算酶活得：

SOD活性（U/g 质量）=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×4（稀释倍数）=294.4U/g 质量。

1. 取20μL羊血清蒸馏水稀释50倍后直接按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定= A测定-A对照=0.467-0.049=0.418，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.771-0.042=0.729，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%=42.7%，按血清/血浆体积计算酶活得：

血清（浆）SOD活性（U/mL）=10×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ×50（稀释倍数）=372.6 U/mL。

1. 取1000万细胞加入1mL提取液，超声破碎，离心取上清，直接按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA测定= A测定-A对照=0.52-0.058=0.462，ΔA空白=A1空白-A2空白=0.802-0.04=0.762，抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定) ÷ΔA空白×100%=39.4%，按细胞/细菌数量计算酶活得：

SOD 活力（U/10⁴ cell）=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总] ÷(1000×V样÷V样总)=0.0065 U/10⁴ cell。
相关发表文献：

1. Beibei Li,Yang Ding,Xiuli Tang, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus). Food and Bioprocess Technology. April 2019;12: 563-574. (IF3.032)
2. Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng, et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019; 162: 364-373. (IF3.712)
3. Yang Yang,Li Jing,Wei Cong, et al. Amelioration of nonalcoholic fatty liver disease by swertiamarin in fructose-fed mice. Phytomedicine. June 2019;59. (IF4.18)

 

1. Siyang Yu,Bo Dong,Zhenfei Fang,et al.Knockdown of lncRNA AK139328 alleviates myocardial ischaemia/reperfusion injury in diabetic mice via modulating miR-204-3p and inhibiting autophagy. Journal of Cellular and Molecular Medicine. July 2018;(IF4.658)
2. Qilong Wang, Guosheng Xiao, Guoliang Chen, et al. Toxic effect of microcystin-LR on blood vessel development. Toxicological & Environmental Chemistry. February 2019;(IF3.547)

参考文献：

1. Spitz D R, Oberley L W. An assay for superoxide dismutase activity in mammalian tissue homogenates[J]. Analytical Biochemistry, 1989, 179(1):8-18.
2. Masayasu M, Hiroshi Y. A simplified assay method of superoxide dismutase activity for clinical use[J]. Clinica Chimica Acta, 1979, 92(3):337-342.

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