脯氨酸脱氢酶（ProDH）活性检测试剂盒 微量法

脯氨酸脱氢酶（ProDH）活性检测试剂盒说明书
微量法
货号：BC4165
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称	规格	保存条件
提取液一	液体100 mL×1瓶	2-8℃保存
提取液二	液体1.2 mL×1支	2-8℃保存
试剂一	液体20 mL×1瓶	2-8℃保存
试剂二	粉剂×1瓶	2-8℃保存
试剂三	粉剂×1瓶	2-8℃保存
试剂四	粉剂×1瓶	-20℃保存

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入2.5 mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂2-8℃保存；
2. 试剂三：临用前加入4 mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂2-8℃保存；
3. 试剂四：临用前加入5 mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂可分装-20℃保存，避免反复冻融。
4. 工作液的配制：首先将试剂三和试剂四配成溶液，临用前根据用量按照试剂一（V）：试剂二（V）：试剂三（V）=1.6（mL）：0.2（mL）：0.15（mL）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少）

产品说明：
ProDH是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。
ProDH催化脯氨酸脱氢生成延丙 酮 酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯 酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的下降，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表ProDH活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、丙 酮、匀浆器/研钵、冰、蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：

1. ΔA大于0.6时或者A3大于1.5时建议将样本上清用蒸馏水稀释后再进行测定。
2. 控制A3在0.8以上（96孔板在0.4以上），若A3小于0.8（用96孔板数值小于0.4时），建议将样本上清用蒸馏水稀释后再进行测定。
3. 空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，变化不超过0.02。

实验实例：

1. 取0.1g稗草加入1mL提取液一进行匀浆研磨，对样本进行处理，取上清稀释2倍，之后按照测定步骤操作，用微量玻璃比色皿测得计算ΔA测定=A3-A4=0.8549-0.4798=0.3751，ΔA空白=A1-A2=0.8941-0.8813=0.0128，ΔA=ΔA测定-ΔA空白=0.3751-0.0128=0.3623，按样本质量计算酶活得：

ProDH（U/g 质量）=333.33×ΔA÷W×稀释倍数=333.33×0.3623÷0.1×2=2415.309 U/g 质量。

1. 取0.1g兔子肾脏组织加入1mL提取液一进行匀浆研磨，对样本进行处理，取上清后按照测定步骤操作，用微量玻璃比色皿测得计算ΔA测定=A3-A4=0.9369-0.6631=0.2738，ΔA空白=A1-A2=0.8941-0.8813=0.0128，ΔA=ΔA测定-ΔA空白=0.2738-0.0128=0.261，按样本质量计算酶活得：

ProDH（U/g 质量）=333.33×ΔA÷W=333.33×0.261÷0.1=869.99 U/g 质量。
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