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- Solarbio
- 北京
- BC3235
- 2025年07月15日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
-20℃
- 保质期：
6个月
- 英文名：
Mitochondrial complex II/succinate-coenzyme Q reductase Activity Assay Kit
- 库存：
99
- 供应商：
北京索莱宝科技有限公司
- CAS号：
BC3235-100T/96SS
- 规格：
100管/96样
线粒体呼吸链复合体Ⅱ/琥珀酸-辅酶Q还原酶活性检测试剂盒说明书
微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC3235
规格：100T/96S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。
| 试剂名称 | 规格 | 保存条件 |
| 提取液一 | 液体65mL×2瓶 | 2-8℃保存 |
| 提取液二 | 液体22mL×1瓶 | -20℃保存 |
| 试剂一 | 液体16mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂二 | 粉剂×1支 | -20℃保存 |
| 试剂三 | 粉剂×2支 | 2-8℃保存 |
| 试剂四 | 液体2.5mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 试剂五 | 液体1.5mL×1支 | 2-8℃保存 |
- 试剂二：临用前加入0.1mL丙 酮，丙 酮易挥发，使用完毕后注意封口，-20℃可保存2个月；
- 试剂二工作液：临用前根据样本量将试剂二：丙 酮=10μL:1mL（约100T）混合备用，现用现配；
- 试剂三：临用前取1支加入1mL丙 酮，充分溶解，用不完的试剂-20℃分装可保存4周（1瓶粉剂溶解后可做100T，为延长试剂盒使用时间，此产品多给1支粉剂），注意封口；
- 工作液的配制：临用前根据样本量将丙 酮：试剂二工作液：试剂三=0.25mL：0.5mL：0.25mL（1mL，约50T）混合备用，现用现配。
线粒体呼吸链复合体Ⅱ又称琥珀酸-辅酶Q还原酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，催化琥珀酸氧化生成延胡索酸，同时辅基FAD还原为FADH2，后者进一步还原氧化型辅酶Q生成还原型辅酶Q，是呼吸电子传递链的支路。
复合体Ⅱ的催化产物还原型辅酶Q可进一步还原2,6-二氯吲哚酚，2,6-二氯吲哚酚在605nm有特征吸收峰，通过检测2,6-二氯吲哚酚的减少速率来计算该酶活性。
注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、细胞超声破碎仪、丙 酮、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：
- 为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定的吸光值大于1.2（微量比色皿）/0.8（96孔板），可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA大于0.6（微量比色皿）/0.4（96孔板），需将样本稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数）；若ΔA偏小，则可以通过增加加入的样本体积来提高灵敏度。
- 样本蛋白浓度需自行测定。由于提取液一中含有一定浓度的蛋白（约1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去重悬试剂（提取液一+提取液二）本身的蛋白含量（约0.5mg/mL）。
- 推荐使用样本蛋白浓度计算酶活，若用样本质量计算，则需加测胞浆提取物酶活，上清和沉淀酶活之和方为总酶活。
- 附：使用样本重量计算公式：（样本检测数为50T/24S）
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活性（U/g 质量）= [ΔA1×V反总÷（ε×d）×109] ÷ (W÷V提取×V样) ÷ T =190.5×ΔA1÷W
B、沉淀中复合体Ⅱ活性的计算:
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活性（U/g 质量）= [ΔA2×V反总÷（ε×d）×109] ÷ (W÷V重悬×V样) ÷ T=76.2×ΔA2÷W
C、样本复合体Ⅱ总活性的计算：
样本复合体Ⅱ总活性即为上清中复合体Ⅱ活性与沉淀中复合体Ⅱ活性之和。
复合体Ⅱ总活性（U/g 质量）=190.5×ΔA1÷W +76.2×ΔA2÷W
ΔA1：上清测定值；ΔA2：沉淀测定值；V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V提取：样本匀浆加入提取液一的体积，1mL；V重悬：沉淀重悬加入提取液一和提取液二的总体积，0.4mL；V样：加入样本体积，0.01mL；T：反应时间，5min；W：样本重量，g；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
D、以96孔板计算：
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm进行计算即可。
- 附：使用细胞数量计算公式：（样本检测数为50T/24S）
单位的定义：每106个细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活性（U/106 cell）= [ΔA1×V反总÷（ε×d）×109] ÷ (N÷V提取×V样) ÷ T =190.5×ΔA1÷N
B、沉淀中复合体Ⅱ活性的计算:
单位的定义：每106个细胞在反应体系中每分钟消耗1nmol 2,6-二氯吲哚酚定义为一个酶活力单位。
复合体Ⅱ活性（U/106 cell）= [ΔA2×V反总÷（ε×d）×109] ÷ (N÷V重悬×V样) ÷ T=76.2×ΔA2÷N
C、样本复合体Ⅱ总活性的计算：
样本复合体Ⅱ总活性即为上清中复合体Ⅱ活性与沉淀中复合体Ⅱ活性之和。
复合体Ⅱ总活性（U/106 cell）=190.5×ΔA1÷N +76.2×ΔA2÷N
ΔA1：上清测定值；ΔA2：沉淀测定值；V反总：反应体系总体积，2×10-4L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩尔消光系数，2.1×104 L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V提取：样本匀浆加入提取液一的体积，1mL；V重悬：沉淀重悬加入提取液一和提取液二的总体积，0.4mL；V样：加入样本体积，0.01mL；T：反应时间，5min；N：细胞数量，以106 计；109：单位换算系数，1mol=109nmol。
D、以96孔板计算：
将上述公式中的d-1cm改为d-0.6cm进行计算即可。
相关发表文献：
- Qiuli OuYang, Nengguo Tao, Miaoling Zhang. A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum. February 2018;(IF4.259)
- Wang M, Zhang Y, Xu M, et al. Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke-induced airway epithelial cell injury model[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2019, 134: 229-238.
- Bao Z, Xu X, Chao H, et al. ERK/Nrf2/HO-1 pathway-mediated mitophagy alleviates traumatic brain injury- induced intestinal mucosa damage and epithelial barrier dysfunction[J]. 2017.
- Mühling J, Tiefenbach M, López-Barneo J, et al. Mitochondrial complex II participates in normoxic and hypoxic regulation of α-keto acids in the murine heart[J]. Journal of molecular and cellular cardiology, 2010, 49(6): 950-961.
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文献和实验| AuthorJiawei Mei, Dongdong Xu, Lingtian Wang, Lingtong Kong, Quan Liu, Qianming Li, Xianzuo Zhang, Zheng Su, Xianli Hu, Wanbo Zhu, Ming Ye, Jiaxing Wang, Chen Zhu | Publish_toADVANCED MATERIALS |
| IF29.4000 | PMID37262064 |
指在生物体氧化还原中，参与电子传递的一系列氧化还原酶系，通常系指通过线粒体等的分子态氧氧化 NADH以及琥珀酸等的酶系。其电子传递顺序如下： O3 ←细胞色素（ a a3 ）复合体←细胞色素 c ←细胞色素 c1 但该顺序也表示每个前面物质的还原型将其后面物质的氧化型还原，这样反复进行，最终将分子态氧氧化成水。在呼吸链中有非血红素铁和铜原子等参与。在细胞内呼吸链系存在于线粒体的内膜上，各阶段的酶及因素可与不溶
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）处于中心位置，其同时也作为机体代谢稳态的主要调控因子。目前，二甲双胍通过抑制线粒体电子传递链的复合物 I 而激活 AMPK 已被广泛接受。然而，在他们的研究中却发现能量水平的下降只存在小鼠服用高剂量二甲双胍的个体，也就是说，低剂量的二甲双胍不会引起线粒体呼吸链复合体 I 的抑制以及 AMP/ATP 比值的升高。 因此，有必要深入探讨临床相关剂量的二甲双胍是如何激活 AMPK 的。通过一系列的生化实验和观察，他们发现临床剂量的二甲双胍能充分抑制溶酶体的空泡 H+-ATPase（v-ATPase
广义的细胞色素 c是含有血红素 c的细胞色素之总称。通常是指主要存在于高等动植物、酵母、霉菌等线粒体中的细胞色素 c，起着传递电子的作用。为分子量约 1.3万的碱性蛋白质，还原型的吸收带为 550、 520、 415毫微米，氧化型为 407毫微米。α 因此很早便被研究，并获得结晶。不仅一级结构而且立体结构也已清楚（图 1）。其结构基本上是生物界共有的。由细胞色素 c氧化酶〔细胞色素（ a＋ a3 ）复合体〕氧化。在呼吸链中从细胞色素 c开始接受电子，各种还原酶都已清楚
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