乳酸脱氢酶试剂盒（LDH） 微量法

L-乳酸脱氢酶（L-LDH）活性检测试剂盒说明书

微量法
注意：本产品试剂有所变动，请注意并严格按照该说明书操作。
货号：BC0685
规格：100T/48S
产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前加入1.3 mL蒸馏水充分溶解备用，配好后可分装成小管-20℃保存，可保存2周，禁止反复冻融；
2. 标准品：20 μmol/mL 丙 酮酸钠溶液。

产品说明：
L-LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙 酮酸与L-乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD⁺/NADH之间互变。

L-LDH催化NAD⁺氧化L-乳酸生成丙 酮酸，丙 酮酸进一步与2,4-二硝 基苯 肼作用生成丙 酮 酸二硝 基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与 丙 酮酸浓度成正比

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器/细胞超声破碎仪、冰和蒸馏水。
操作步骤：具体操作步骤详见“产品资料”附件
注意事项：

1. 1. 1. 1. ΔA大于1.3或者小于0.01事，建议将样本用蒸馏水稀释或者增大样本量进行实验、

实验实例：

1. 1. 1. 1. 称取0.103g景天叶片，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。之后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.275-0.199=0.076，带入标曲y=0.5218x+0.0063，R²=0.9983，得x=0.134 µmol/mL，计算乳酸脱氢酶活性得：L-LDH（U/g 质量）=66.67 ×x÷W =86.74 U/g
         2. 称取0.109 g兔肝，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清用蒸馏水稀释80倍后置冰上待测。之后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.795-0.132=0.663，带入标曲y=0.5218x+0.0063，R²=0.9983，得x=1.259 µmol/mL，计算乳酸脱氢酶活性得：L-LDH（U/g 质量）=66.67 ×x÷W ×稀释倍数=61605.53 U/g
         3. 取50μL马血清之后按照测定步骤操作，用96孔板测得计算ΔA=A测定管-A对照管=0.415-0.161=0.254，带入标曲y=0.5218x+0.0063，R²=0.9983，得x=0.475 µmol/mL，计算乳酸脱氢酶活性得：L-LDH（U/mL）=66.67 ×x =31.67 U/mL

相关发表文献：

1. Zhou F, Du J, Wang J. Albendazole inhibits HIF-1α-dependent glycolysis and VEGF expression in non-small cell lung cancer cells[J]. Molecular and cellular biochemistry, 2017, 428(1-2): 171-178.
2. Zhang H, Da Z, Feng Y, et al. Enhancing the electricity generation and sludge reduction of sludge microbial fuel cell with graphene oxide and reduced graphene oxide[J]. Journal of cleaner production, 2018, 186: 104-112.
3. Zhao B, Sun L, Jiang X, et al. Genipin protects against cerebral ischemia-reperfusion injury by regulating the UCP2-SIRT3 signaling pathway[J]. European journal of pharmacology, 2019, 845: 56-64.
4. Zhao H L, Wu B Q, Luo Y, et al. Exogenous hydrogen sulfide ameliorates high glucose-induced myocardial injury & inflammation via the CIRP-MAPK signaling pathway in H9c2 cardiac cells[J]. Life sciences, 2018, 208: 315-324.

参考文献：

1. Huang P H, Fu L C, Huang C S, et al. The uptake of oligogalacturonide and its effect on growth inhibition, lactate dehydrogenase activity and galactin-3 release of human cancer cells[J]. Food chemistry, 2012, 132(4): 1987-1995.
2. Papaneophytou C, Zervou ME, Theofanous A. Optimization of a Colorimetric Assay to Determine Lactate Dehydrogenase B Activity Using Design of Experiments[J]. Journal of Biomolecular Screening, 2021, 26(3): 383-399.

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