酵母基因组DNA提取试剂盒

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取酵母基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组DNA可用于各种常规操作，包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
操作步骤：
1.取酵母细胞（不超过5×107cells），8000rpm离心1min，尽量吸除上清。
注意：过夜培养酵母菌液OD值为2.0左右，离心收集菌体，用PBS洗涤尽量去除培养基。
2.酵母细胞壁的破除：向酵母菌体中加入470μL山梨醇Buffer。充分悬浮菌体，加入25μL酵母破壁酶和5μL巯基还原剂，充分混匀。30℃处理1-2h，期间可颠倒离心管混匀数次。
3.12000rpm离心1min，弃上清，收集沉淀。
4.向沉淀中加入300μL溶液A，充分悬浮沉淀，向悬浮液中加入2μLRNaseA，充分颠倒混匀，室温放置10min。
5.加入220μL溶液B，再加入20μL的蛋白酶K，充分颠倒混匀，65℃水浴消化15-30min，消化期间可颠倒离心管混匀数次。
6.8000rpm离心30s，取上清。（尽快吸出，温度降至室温后会出现白色浑浊液体）
7.冷却至室温，加入375μL无水乙醇，混匀后，将液体加入吸附柱中，8000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8.向吸附柱中加入600μL漂洗液(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)。12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
9.向吸附柱中加入600μL漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
10.12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续实验如酶切、PCR等。
11.将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200μL经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心1min。
12.离心所得脱液再加入吸附柱中，12000rpm离心2min，即可得到高质量的基因组DNA。

使用D1900-酵母基因组提取试剂盒与A Company、B Company进行对比实验。 分别提取啤酒酵母、毕赤酵母DNA，进行核酸电泳胶图对比；提取的洗脱体积均为50μL，RNA样量2-4μL，琼脂糖凝胶浓度为1%，125v 电泳30min。

使用D1900-酵母基因组提取试剂盒与A Company、B Company进行对比实验。 分别提取啤酒酵母、毕赤酵母DNA，浓度及比值结果。