组织线粒体分离试剂盒

Thermo Scientific组织线粒体分离试剂盒§为从软及硬组织中分离完整线粒体提供了新的工具。该试剂盒提供两种分离线粒体的方法。第一种方法使用独特的基于试剂的方法，可以同时处理多个样品。第二种方法依赖于传统的杜恩斯匀浆及下游分离细胞器的方法。两种方法均使用台式微量离心机进行差速离心来分离完整线粒体，整个过程在60分钟以内即可完成。而且，两种方法均经过优化，在获得最大量的线粒体的同时将对其完整性的影响降至最小。分离得到的线粒体可用于1D和2D电泳、蛋白免疫印迹以及利用质谱进行蛋白测定等下游应用。

产品特点：

线粒体完整性分析。分别使用基于试剂的方法(A和B)和杜恩斯匀浆法（C和D）从大鼠肝脏（图1，2，3，5及6）和心脏（图4）中制备线粒体(M)和胞浆(C)组分。利用蛋白质免疫印迹分析各组份中COX4、电压依赖性离子通道(VDAC)以及细胞色素C。使用的底物为用于蛋白免疫印迹的SuperSignal皮克级化学发光底物(产品货号 34080)。COX4是线粒体内膜蛋白，VDAC是线粒体外膜蛋白，细胞色素C位于线粒体膜间质内。

利用2D蛋白免疫印迹对分离的线粒体中的超氧化物歧化酶(Mn-SOD)进行分析。利用杜恩斯匀浆法从雌性SD（Sprague-Dawley）大鼠的肝脏中分离完整的线粒体。利用Thermo Scientific M-PER哺乳动物细胞总蛋白抽提试剂(产品货号78501)裂解分离得到的线粒体将大约35μg的线粒体总蛋白加入到2D上样缓冲液(8M尿素,4% CHAPS, pH 5-8 载体两性电解质, 50 mM DTT)中。先用pH 5-8 IPG胶条对蛋白进行电泳，然后用8-16%SDS-PAGE进行第二维电泳，最后利用蛋白质免疫印迹分析Mn-SOD。

参考文献

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