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- 完成不可溶蛋白重折叠中至关重要的第一步。
- 易于使用,仅有一种溶液包装形式。
- 与Thermo Scientific增强型考马斯蛋白定量分析试剂(产品货号23236)兼容,可用其测定蛋白表达水平。
- 专利的变性剂,可通过透析将其除去以便进行SDS-PAGE分析。
- 可以向其中添加还原剂或螯合剂。
更多产品链接:http://www.thermo.com.cn/Product4509.html
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文献和实验)在4~8 mol/L 尿素中具有蛋白水解酶活性,在包涵体的溶解和复性过程中会引起蛋白质的降解。 溶解 变性剂盐酸胍/尿素是包涵体常用的溶解试剂,通常还会加入一些去污剂(NLS、CTAB、SDS) 和还原剂(巯基乙醇、二硫苏糖醇等)。它们通过改变蛋白质的结构,打开蛋白质肽链。由于包涵体是部分折叠蛋白质聚集而成的具有天然或天然样构象的二级结构。如在适合的条件下将其溶解变性,这些天然样构象的二级结构将不被破坏而保留,这样将更利于复性工艺中的蛋白质回收。部分学者认为,高浓度的变性剂(盐酸胍等)能够完全破坏掉蛋白
条带说明,从左到右,或1234567..... 2、建议把流程中的各个部分所用缓冲液说明一下,例如: 破菌缓冲液:如pH8.0,20mMTris,0.5N NaCl 破菌方法:如超声,4s工作,4s间隙,冰水浴,共200次 包涵体洗涤液:如PBS(pH7.4,20mM PB,0.15N NaCl) 包涵体溶解液:如pH8.0,20mMTris,0.5N NaCl,8M尿素 柱平衡液:如pH8.0,20mMTris,0.5N NaCl,8M尿素,20mM 咪唑 柱淋洗液:如pH
方式,其优点是标签小,纯化步骤简便,纯化条件温和,能纯化可溶性/包涵体蛋白,一般不会影响蛋白的功能结构,且可以纯化出大量的目标蛋白,但该标签不适合易氧化蛋白或膜蛋白的纯化。GST tag(谷胱甘肽巯基转移酶) 的洗脱条件温和,有助于保持蛋白功能活性,适合 pull-down 检测,具有很好的线性动态范围。但缺点是分子量较大,可能会影响蛋白质的功能和下游实验。另外,如果蛋白不可溶,很难用变性的方法进行纯化。 MBP tag(麦芽糖结合蛋白标签) 可以减少目标蛋白的降解,增加蛋白的表达量和稳定性,提高
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