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- 2025年07月16日
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上海一研
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低温冷藏
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50T
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片反应五要素：
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片组成及试剂配制:
1、 酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
注意事项：人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片建议加样顺序是阴性质控品、待检样本、阳性质控品。4. PCR扩增（扩增区）
1) 仪器设置（以ABI Prism 7500为例）
将PCR反应管放入PCR仪内，按照对应顺序设置阴性质控品(NTC)、阳性质控品(Standard)及待检样本(Unknown)。Reporter Dye为FAM，Quencher Dye为None，参比染料(Passive Reference)为 None。
2 ） 扩增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集荧光信号，反应体系为25 μl。
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片【结果分析条件设定】
u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；
3. 以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片【结果判断】
1. 阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；
3. 阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果；
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，可能会导致出现假阴性结果。【试剂盒使用注意事项】
1. 有关实验室管理规范请严格按照行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理规范执行。
2. 本试剂盒仅用于体外检测。
3. 实验请严格分区操作：
第一区：PCR前准备区 — 准备扩增所需试剂；
第二区：样本处理区 — 待测样本和对照品处理；
第三区：检测区 — PCR扩增检测。
4. 各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染，实验后即请清洁工作台；
5. 试剂盒内各试剂使用前，充分融化后请稍事离心。
6. 在－20℃保存的样本裂解产物，应在加样前置室温解冻，作短暂离心后使用。
7. 分装有反应液的检测板或装入密实袋内再转移至样本区。
8. 加样时应使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快封上封板膜。
9. 扩增完毕立即取出检测板，密封在专用塑料袋内，丢弃于指定地点。
10. 反应液分装时应尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。
11. 实验中用过的吸头请直接打入盛有1%次的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。
12. 工作台及各物品定期用1%次、75%酒精或紫外灯进行消毒。
Human Neopterin ELISA Kit人新蝶呤 (Neopterin)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human Neopterin ELISA Kit
Human ME20M (Melanoma Associated ME20) ELISA Kit人黑色素瘤关联ME20 (ME20M)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ME20M (Melanoma Associated ME20) ELISA Kit
Human PXR (Pregnane X Receptor) ELISA Kit人孕烷受体(PXR)酶联免疫吸附测定试剂盒Human PXR (Pregnane X Receptor) ELISA Kit
Human ALOX15B (Arachidonate-15-Lipoxygenase, Type B)ELISA Kit人花生四烯酸-15-脂加氧酶B(ALOX15B)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ALOX15B (Arachidonate-15-Lipoxygenase, Type B)ELISA Kit
Human RELB (V-Rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog B) ELISA Kit人V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物B (RELB)酶联免疫吸附测定试剂盒Human RELB (V-Rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog B) ELISA Kit
Human IL-24 (Interleukin 24) ELISA Kit人白介素24 (IL-24)酶联免疫吸附测定试剂盒Human IL-24 (Interleukin 24) ELISA Kit
Human AIM2 (Absent In Melanoma 2) ELISA Kit人黑素瘤缺乏因子2(AIM2)酶联免疫吸附测定试剂盒Human AIM2 (Absent In Melanoma 2) ELISA Kit
Human TSPAN30/CD63 (Tetraspanin 30) ELISA Kit人CD63/四旋蛋白30 (TSPAN30/CD63)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TSPAN30/CD63 (Tetraspanin 30) ELISA Kit
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片大鼠睫状神经营养因子elisa试剂盒大鼠睫状神经营养因子试剂盒规格型号：96T/48T大鼠睫状神经营养因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠睫状神经营养因子试剂盒、大鼠睫状神经营养因子eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠结合珠蛋白elisa试剂盒大鼠结合珠蛋白试剂盒规格型号：96T/48T大鼠结合珠蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠结合珠蛋白试剂盒、大鼠结合珠蛋白eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠结缔组织生长因子elisa试剂盒大鼠结缔组织生长因子试剂盒规格型号：96T/48T大鼠结缔组织生长因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠结缔组织生长因子试剂盒、大鼠结缔组织生长因子eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠抗甲状腺球蛋白抗体elisa试剂盒大鼠抗甲状腺球蛋白抗体试剂盒规格型号：96T/48T大鼠抗甲状腺球蛋白抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠抗甲状腺球蛋白抗体试剂盒、大鼠抗甲状腺球蛋白抗体eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠抗精子抗体elisa试剂盒大鼠抗精子抗体试剂盒规格型号：96T/48T大鼠抗精子抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠抗精子抗体试剂盒、大鼠抗精子抗体eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5belisa试剂盒大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b试剂盒规格型号：96T/48T大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b试剂盒、大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5beisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体elisa试剂盒大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒规格型号：96T/48T大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒、大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
②引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基，特别是最末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片组成及试剂配制:
1、 酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
| 产品名称 | 规格 | 分类 |
| 人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片 | 50T | PCR检测试剂盒 |
1) 仪器设置（以ABI Prism 7500为例）
将PCR反应管放入PCR仪内，按照对应顺序设置阴性质控品(NTC)、阳性质控品(Standard)及待检样本(Unknown)。Reporter Dye为FAM，Quencher Dye为None，参比染料(Passive Reference)为 None。
2 ） 扩增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集荧光信号，反应体系为25 μl。
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片【结果分析条件设定】
u 基线（Baseline）设定：应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域（所有样本荧光信号无较大波动），起始点（Start）应避开荧光采集起始阶段的信号波动，终止点（End）应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环，建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定：将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性，无指数扩增期，Ct=40或无Ct；
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性，有明显的指数扩增期，Ct值应小于等于35；
3. 以上要求需在一次实验中同时满足，否则该次实验视为无效。
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片【结果判断】
1. 阳性：有明显的指数扩增期，且Ct＜38；
2.可疑：有明显的指数扩增期，且38≤Ct<40，此时样本为可疑样本；对于可疑样本建议复核一次，若复核结果Ct<40且有指数扩增期，则判定为阳性，否则判定为阴性；
3. 阴性：无指数扩增期，Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果；
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降，可能会导致出现假阴性结果。【试剂盒使用注意事项】
1. 有关实验室管理规范请严格按照行业行政主管部门颁布的有关基因扩增检验实验室的管理规范执行。
2. 本试剂盒仅用于体外检测。
3. 实验请严格分区操作：
第一区：PCR前准备区 — 准备扩增所需试剂；
第二区：样本处理区 — 待测样本和对照品处理；
第三区：检测区 — PCR扩增检测。
4. 各区物品均为专用，不得交叉使用，避免污染，实验后即请清洁工作台；
5. 试剂盒内各试剂使用前，充分融化后请稍事离心。
6. 在－20℃保存的样本裂解产物，应在加样前置室温解冻，作短暂离心后使用。
7. 分装有反应液的检测板或装入密实袋内再转移至样本区。
8. 加样时应使样品完全落入反应液中，不应有样品粘附于管壁上，加样后应尽快封上封板膜。
9. 扩增完毕立即取出检测板，密封在专用塑料袋内，丢弃于指定地点。
10. 反应液分装时应尽量避免产生气泡，上机前注意检查各反应管是否盖紧，以免荧光物质泄露污染仪器。
11. 实验中用过的吸头请直接打入盛有1%次的废物缸内，并与其他废弃物品一同灭菌后丢弃。
12. 工作台及各物品定期用1%次、75%酒精或紫外灯进行消毒。
Human Neopterin ELISA Kit人新蝶呤 (Neopterin)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human Neopterin ELISA Kit
Human ME20M (Melanoma Associated ME20) ELISA Kit人黑色素瘤关联ME20 (ME20M)酶联免疫吸附测定试剂盒Human ME20M (Melanoma Associated ME20) ELISA Kit
Human PXR (Pregnane X Receptor) ELISA Kit人孕烷受体(PXR)酶联免疫吸附测定试剂盒Human PXR (Pregnane X Receptor) ELISA Kit
Human ALOX15B (Arachidonate-15-Lipoxygenase, Type B)ELISA Kit人花生四烯酸-15-脂加氧酶B(ALOX15B)酶联免疫吸附测定试剂盒 Human ALOX15B (Arachidonate-15-Lipoxygenase, Type B)ELISA Kit
Human RELB (V-Rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog B) ELISA Kit人V-Rel网状内皮增生病毒癌基因同源物B (RELB)酶联免疫吸附测定试剂盒Human RELB (V-Rel Reticuloendotheliosis Viral Oncogene Homolog B) ELISA Kit
Human IL-24 (Interleukin 24) ELISA Kit人白介素24 (IL-24)酶联免疫吸附测定试剂盒Human IL-24 (Interleukin 24) ELISA Kit
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Human TSPAN30/CD63 (Tetraspanin 30) ELISA Kit人CD63/四旋蛋白30 (TSPAN30/CD63)酶联免疫吸附测定试剂盒Human TSPAN30/CD63 (Tetraspanin 30) ELISA Kit
人E-选择素S128R基因多态性检测试剂盒(PCR-RLFP)图片大鼠睫状神经营养因子elisa试剂盒大鼠睫状神经营养因子试剂盒规格型号：96T/48T大鼠睫状神经营养因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠睫状神经营养因子试剂盒、大鼠睫状神经营养因子eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠结合珠蛋白elisa试剂盒大鼠结合珠蛋白试剂盒规格型号：96T/48T大鼠结合珠蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠结合珠蛋白试剂盒、大鼠结合珠蛋白eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠结缔组织生长因子elisa试剂盒大鼠结缔组织生长因子试剂盒规格型号：96T/48T大鼠结缔组织生长因子试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠结缔组织生长因子试剂盒、大鼠结缔组织生长因子eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠抗甲状腺球蛋白抗体elisa试剂盒大鼠抗甲状腺球蛋白抗体试剂盒规格型号：96T/48T大鼠抗甲状腺球蛋白抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠抗甲状腺球蛋白抗体试剂盒、大鼠抗甲状腺球蛋白抗体eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠抗精子抗体elisa试剂盒大鼠抗精子抗体试剂盒规格型号：96T/48T大鼠抗精子抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠抗精子抗体试剂盒、大鼠抗精子抗体eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5belisa试剂盒大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b试剂盒规格型号：96T/48T大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5b试剂盒、大鼠抗酒石酸酸性磷酸酶5beisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体elisa试剂盒大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒规格型号：96T/48T大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体试剂盒、大鼠抗甲状腺过氧化物酶抗体eisa试剂盒保存条件：2-8℃保质期：6个月。
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文献和实验相关实验
发表论文当然需要一些质量高的图片，那么如何将ClustalX序列比对的结果转化成比较漂亮的图片呢？小编在此搜集了一个还不错的教程，分享给大家。 多序列比对在分子生物学中是一个基本方法，用来发现特征序列，进行蛋白分类，证明序列间的同源性，帮助预测新序列二级结构与三级结构，确定PCR 引物，以及在分子进化分析方面均有很大帮助，Clustal W(Dos版本)很适合这些方面的要求，Clustal X是window版本。 用Clustal比对后的序列，有时候
6 因为即使用T7+SP6证明有插入但也不能确定为目的片段 这样既解决了假阳性也解决了基因的特异性问题 如下图： 总结如下： 1.PCR引物的选择 （ 此点至关重要，这也是菌液PCR的独特魅力所在） 选择一个载体上的特异性序列和一个目的基因上的特异性序列作为引物 如：pCDNA3.0载体：T7+目的基因-R 或SP6+目的基因-F pCDNA3.1 myc his C
。因此，在指数增长期的Ct值就成为了计算模板含量的一个关键值 （3）那么，为什么知道了Ct值就能够得到最初的目的基因含量呢？图中表示一个基因的单次反应扩增曲线。上面这个公式计算的是扩增产物的分子数N，它等于模板的分子数乘以1+扩增效率的n次方，n代表循环次数。也就是说，如果扩增效率为100%，产物分子数就等于模板数乘以2的n次方。但是显然，在线性增长期和平台期，扩增效率不可能是100%，因此上述PCR理论方程只在指数期成立，也就是绿色框的部分。 数据处理 1、这里的三张图片分别展示了我们在做荧光定量PCR
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