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AmberliteIRA-411阴离子交换树脂(AR)北京厂

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  • Y16171-NKY
  • 北京
  • 2025年07月11日
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    • 英文名

      Amberlite IRA-411 chloride form

    • 保质期

      长期

    • 供应商

      北京百奥莱博科技有限公司

    • 保存条件

      RT

    • 规格

      100g|250g

    特别提示:包括AmberliteIRA-411阴离子交换树脂在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!


    产品名称:AmberliteIRA-411阴离子交换树脂
    英文名称:Amberlite IRA-411 chloride form
    产品货号:Y16171
    产品规格:100g|250g

    储存条件:RT
    外观:颗粒

    除了AmberliteIRA-411阴离子交换树脂(AR)北京厂家,我公司还供应以下相关产品:



    名称:羧甲基纤维素钠(粘度300~800)
    货号:QN3987
    规格:25g

    名称:GST标签纯化树脂
    货号:QN4045
    规格:5ml|10ml
    pGEX载体表达的外源蛋白与谷胱甘肽S-转移酶融合,因此可以通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析进行纯化。GSTs是一类以谷胱甘肽(γ-谷氨酰半胱氨酰甘氨酸)作为底物,通过形成硫醇尿酸失活毒性小分子的酶。由于GST对底物的亲和力是亚毫摩尔级的,因此谷胱甘肽固化于琼脂糖形成的亲和层析树脂对GST及其融合蛋白的纯化效率很高。可以用含游离谷胱甘肽的缓冲液洗脱结合GST融合蛋白。树脂用3mol/L NaCl的缓冲液再生。谷胱甘肽琼脂糖对GST融合蛋白的结合能力很强(每毫升柱床体积的树脂能结合8毫克融合蛋白)。

    别名:谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B
    粒度:45-165µm
    流速:75cm/h          
    工作pH:4~10
    耐压:0.3Mpa
    载量:>5mg谷胱甘肽S-转移酶
    储存条件:4℃保存,有效期至少一年。

    使用说明:
    谷胱甘肽树脂的处理:
    1.轻轻颠倒盛有谷胱甘肽-琼脂糖树脂的容器,将树脂混成匀浆。
    2.取部分匀浆放入15mL聚*烯管(每100mL细菌培养物大约需要2mL匀浆)。
    3.4℃ 500g离心5分钟,小心去掉上清。
    4.在树脂中加入10倍柱床体积预冷的PBS,颠倒数次混匀,4℃ 500g离心5分钟,小心去掉上清。
    5.每毫升树脂加入1毫升冷的PBS,制成50%匀浆,颠倒数次,混合均匀,悬液冰上放置待用。制备细胞抽提物:
    6.每100毫升培养物的细胞沉淀重悬于4mL PBS缓冲液中。
    7.加入溶菌酶至终浓度为1mg/mL,冰上放置30分钟。
    8.用针筒将10mL浓度为0.2%的TritonX-100强行注入黏稠的细胞裂解物中,剧烈振动数次混匀。加入DNase和RNase至终浓度5μg/mL,4℃振动温育10分钟,4℃ 3000 g离心30分钟,去除不溶性细胞碎片,上清转移到一只新管中,加入DTT至终浓度1mmol/L。纯化融合蛋白:
    9.细胞裂解物与适量50%谷胱甘肽-琼脂糖树脂匀浆混和,每100毫升细菌培养物加2mL树脂,于室温轻摇30min。
    10.混合物于4℃以500g离心5分钟,小心去掉上清并留样少许进行SDS聚*烯酰胺凝胶电泳。
    11.沉淀中加入10倍柱床体积的冷的PBS,颠倒离心管数次混匀,洗去未与树脂结合的蛋白。
    12.4℃以500g离心5分钟,小心去掉上清并留样少许进行SDS聚*烯酰胺凝胶电泳。
    13.重复步骤11和12两次。
    14.结合的GST融合蛋白可用谷胱甘肽洗脱液洗脱,也可用凝血酶、肠激酶或Xa因子切割,释放靶蛋白。
    用谷胱甘肽洗脱融合蛋白:
    15.沉淀中加入1倍柱床体积的谷胱甘肽洗脱缓冲液,室温轻轻搅动10min,洗脱树脂上结合的蛋白。
    16.4℃以500g离心5分钟,上清(含洗脱的融合蛋白)移至新管中。
    17.重复步骤a和b两次,合并3次上清。蛋白酶解从结合的GST融合蛋白上回收靶蛋白:
    18.在结合了融合蛋白的树脂中加入凝血酶、肠激酶或Xa因子(根据融合蛋白中的位点选择),每mL树脂加入50单位溶于1mLPBS的蛋白酶。颠倒离心管数次混匀,室温下振荡2—16小时。用小规模实验确定精确时间。
    19.4℃以500g离心5分钟,上清小心移至新管中。(GST仍结合在树脂上,而靶蛋白在上清中,蛋白酶也在上清中,仍需要分离)
    20.10% SDS聚*烯酰胺凝胶电泳分析每一步样品的蛋白质组成。试剂配制:谷胱甘肽洗脱缓冲液:10mmol/L还原型谷胱甘肽,50mmol/L Tris-Cl(pH8.0)

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