BCA蛋白定量试剂盒

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产品详情

产 品组成：
产品组成 250T 1000T
蛋白标准(5mg/ml) 0.5ml 1.5ml
BCA 试剂A 50ml 200ml
BCA 试剂B 1ml 4ml
储存条件：BCA 试剂室温保存。蛋白标准-20℃保存。
有效期：一年。
产品简介：
碱性条件下，蛋白将Cu 2+ 还原为Cu + ， Cu + 与BCA试剂形成紫颜色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲
线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
BCA 法快速灵敏、稳定可靠，对不同种类蛋白质检测的变异系数非常小。BCA 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品
中的化学物质的影响。在组织细胞蛋白提取过程中，常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween 不影响检测结
果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。
使用方法：
A． 96 孔酶标板测定：
1. BCA 工作液配制。根据样品数量，将试剂A和试剂B按（50:1）配制适量BCA 工作液，充分混匀。
2. 蛋白标准工作液配制：根据样品数量配制相应体积的蛋白标准工作液。将蛋白标准储存液用双蒸水5 倍稀释，配
成1mg/ml 的工作液。
3. 标准曲线绘制。取一块酶标板，按以下表格数据加入试剂：
孔号 0 0 1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 7 7
蛋白标准工作液（ul）  0  1  2  4  8  12  16  20
去离子水（ul）  20  19  18  16  12  8  4  0
BCA工作液（ul）  200  200  200  200  200  200  200  200
对应的蛋白含量（ug）  0  1  2  4  8  12  16  20
4. 振荡混匀后，37℃放置30 分钟。
5. 用酶标仪测定 A562，以不含BSA 的光吸收值为空白对照。
6. 以蛋白含量（ μ g）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。
7. 样品测定：将待测蛋白样品用去离子水稀释至适当浓度，取20 μ l 样品，加入200 μ l BCA 工作液，混匀后37℃放
置30 分钟，然后以0 号孔为对照，测定样品吸收值A562。
8. 根据测得的吸收值，在标准曲线上即可查得样品的蛋白含量。
9. 计算蛋白浓度：以查得的蛋白含量除以样品体积20 μl ，再乘以相应的稀释倍数即可得到待测样品的实际浓度。
B． 比色皿测定
按照比色皿规格，与以上方法相同，适当按比例增加各溶液体积即可。