Western转移缓冲液(5×),NC

特别提示：包括Western转移缓冲液(5×),NC在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Western转移缓冲液(5×),NC
产品货号：HR8136
产品规格：500ml



除了Western转移缓冲液(5×),NC，我公司还供应以下相关产品：



名称：蛋白酶抑制剂混合液
货号：BTN80808
规格：1mL
组织/细胞裂解时会释放出大量的内源性蛋白酶，引起蛋白质的降解，影响试验结果。加入外源性蛋白酶抑制剂，抑制蛋白酶的活性，防止蛋白降解，已经成为蛋白质研究的常规操作。

产品特点：
1. 即开即用，不需要单独购买每个成分再配制。
2. 抑制谱广，由多种蛋白酶抑制剂组成，能特异性抑制丝氨酸蛋白酶(Serine Protease)、半胱氨酸蛋白酶(Cysteine protease)、天门冬氨酸蛋白酶。
3.与各种细胞裂解液兼容，可以共同使用。

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：临用前室温融解蛋白酶抑制剂复合物(100×)，混匀，按照1:100 比例加入到组织细胞裂解液中。

注意事项：
1.蛋白酶抑制剂复合物在水溶液中极不稳定，15分钟即可水解掉～50%的活性，需临用前加入。
2. 避免反复冻融，可分装储存。

名称：加热型考马斯亮兰快速染色液
货号：ALH381
规格：500ml|2000ml
本品采用独特的考马斯亮兰G250染色液配方，它是基于一种zuì新的热增强型胶体考马斯亮兰染色技术研制而成。它的独特配方允许在加热的状态下促进胶体考马斯亮兰迅速的渗入蛋白凝胶，并选择性的结合蛋白条带，因此不需要脱色就可以直接观察。

产品特点：
1.快速，15-20分钟立刻可以观察。
2.环保染料，完全不含有各种醋酸，甲*等有毒有刺激性成份。
3.敏感度高于传统的考马斯亮兰染色法一倍左右。

注意事项
1. 用户需要自备微波炉和微波炉用塑料容器，没有微波炉的也可以使用任何加热装置（比如heat block，电炉）以及配套的可以平放需要染色胶大小的烧杯或者金属托盘，当然加热时间需要根据具体情况调节。
2. 实验涉及到加热过程，小心被热水灼伤。
3. 染色液是以50 毫升做一次为标准用量，可以根据容器的大小适当调整用量。
4. 加热和煮沸时间并不特别严格，都应该根据染色效果调整。

储存条件：室温，有效期12个月。

本制品别名：超速考马斯亮蓝染色液|快速考马斯亮蓝蛋白染色液

名称：MBP标签蛋白高度交联纯化树脂
货号：SY0401
规格：5ml
本品是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白（MBP）标签蛋白的亲和层析介质，MBP可促进连接蛋白的正确折叠，增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白，结合的融合蛋白可以用10mM麦芽糖进行温和洗脱，保护了目的蛋白的活性，MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。

此外，本品以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，具有更高的物理化学特性，可以耐受更高的压力，在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化，更适于工业大规模蛋白的纯化。

基质（Matrix）：高度交联的6%琼脂糖微球
配体（Ligand）：糊精
孔径（Bead size）：45-165µm
载量（Capacity）：＞10mg MBP蛋白（80kDa）
zuì大压力（PressureMax）：0.3 MPa, 3bar
pH稳定范围：3-12
储存缓冲液：20%乙醇
储存条件：4℃，有效期2年

名称：DAB法显色试剂盒(小鼠IgG)
货号：QN1162
规格：1盒
本试剂盒主要用于western blotting的DAB显色，含有抗小鼠IgG酶标二抗。

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，经过底物显色以检测电泳分离的特异性的蛋白。

试剂盒组分：
封闭试剂————————————30g
10倍浓缩抗体稀释液———————50ml
酶标二抗————————————0.5ml，效价1:500～3000
20倍DAB浓缩显色液-———————5mlA+5mlB。

常规电泳转膜后:
1) 清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T 漂洗3 次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2) 按5g 封闭试剂加100ml 双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜，封闭液内，摇床震动，室温封闭30min。用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次5min。
3) 将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml 10×抗体稀释液加入90ml 双蒸水，混匀，可4℃保存三个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4) 用1×的抗体稀释液稀释抗体。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5) 用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次5min。
6) 用稀释好的抗体稀释液稀释抗体。根据用量，按10ml 抗体稀释液加入10ul HRP 标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
7) 用TBS-T ，PH7.6 洗液，室温漂洗3 次每次10min。
8) 配制DAB 显色：根据用量，取TBS-T 4ml，加入DAB 显色液A、DAB 显色液B 各200ul，混匀，加在膜正面，室温下显色。在目标条带显出后，而且背景未出时，放入水中终止显色。

注意事项：
1. 请根据一抗来源选择试剂盒。
2. western blotting DAB显色法操作简单，但其敏感性与ECL发光发有一定的差距，一般只适用于丰度较高的蛋白。
3. 可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长zuì终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可延长抗体孵育时间。
4. 如果完全没有条带，请检查前期蛋白处理及实验过程， 如果确认无误，反复两次依旧无结果，请换用ECL发光法显色。
5. TBS-T（0.01M）配制方法：称取NaCl 8.5g ，Tris 1.21g ，用800ml 的双蒸水溶解，用盐酸调PH 到7.6，再加入0.5ml Tween－20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

储存条件：-20℃避光，有效期一年。