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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
1×10^6 细胞数/ml
- 相关疾病：
见说明书
- 细胞形态：
见说明书
- 器官来源：
见说明书
- 运输方式：
复苏或冻存运输
- 年限：
P4代细胞
- 生长状态：
贴壁/悬浮
培养条件：DMEM+10% FBS；37℃，5% CO2
生长状态：贴壁
细胞培养步骤
一．培养基及培养冻存条件准备：
1） 准备培养基；北美胎牛血清，10%；双抗1%。
2） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞，传代可参考以下方法： 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
1. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
2. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
3. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。 细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。 下面T25瓶为例；
1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项：
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。
2. 先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时（4h左右），稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。
3. 静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4. 贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。
5. 细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用客户自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。
6. 细胞胰酶消化液建议使用PBS配制，
7. 因为细胞培养过程外因太多，所以我们的售后保障期为一周，超过一周的细胞我们会酌情处理，但不提供免费更换服务。 细胞运输和保存：可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：（1）干冰运输，收到后立即转入液氮冻存或直接复苏；存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
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文献和实验养BMDC有好几个月了，看了2、3篇文献就开搞，发现论坛里还是有一些战友养这个。就想开个专题讨论贴，请新手老手都上来谈谈经验或者问些问题。集思广益，大家相互促进下。 我在论坛里看到因为有战友养DC看百把篇文献的，感到佩服又奇怪，就BMDC的培养我目前只知道有个经典版本和改良版本。 我用的是改良版本，参考文献改天附上（可能养这个的战友大多看过了）。 1. 取小鼠股骨胫骨，小鼠要年轻！（6W-8W，以前用只一年左右的养出来外形也张牙舞爪，但流式检测没有CD11c表达，很奇怪
一、方法 根据1999年lutz的方法，做了一些改进，培养DC很多人用的是高浓度的细胞，高浓度的因子，但是这样产量不高，我每一次分离一只小鼠的骨髓，大约可以得到107个细胞，分成10盘，每盘10 ml培养基，用低浓度的细胞因子，这样可以大大提高产量，每次能培养得到1*107个DC左右，流式细胞术检测：细胞纯度应该大于90%，这个方法还是很好用的。 二、具体步骤 1. C57Bl/6小鼠 2. 处死小鼠，75%酒精浸泡10 min。 3. 解剖取出小鼠
Cell Reports：天津医科大学王荃 / 姚智发现肠道共生细菌参与肠道稳态调控新机制
对 DSS 诱导小鼠结肠炎具有显著的缓解效应，并通过多个模型验证发现该菌株在预防和治疗 DSS 诱导结肠炎中均有作用。 机制研究发现该菌株显著提升了小鼠肠道中 CD103 阳性 DC 细胞以及 iTreg 的数量和比例。体外实验发现，该菌培养上清液中小于 3KD 组分处理的 DC 具有免疫耐受的特征；比较代谢组学显示细菌培养上清液中小于 3KD 组分富含胆碱，胆碱能够直接增强小鼠肠系膜淋巴结 DC 和 BMDC 的免疫耐受特征。 该菌的基因组学研究发现其具有编码磷脂酰丝氨酸合成酶的基因，该基因
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