- ¥1000
- 钦诚生物
- 上海
- QC1505
- 2025年07月05日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
产品名称：GS115-Zeo毕赤酵母菌
质粒图谱
GS115-Zeo毕赤酵母菌使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
GS115-Zeo毕赤酵母菌注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验【原创/分享】GS115毕赤酵母表达外源蛋白较详细步骤！！！（从验证到阳性克隆的筛选）
小弟把最近一个多月来所做的工作，做了个总结，供大家一起分享，希望版主能加分，现在我还是0分，很多帖子不能阅览，希望版主加分，今后我实验有了新的进展，我会把总结发上来，和大家一起分享。我做的是GS115表达VEGF，目前已经做到阳性克隆的筛选这一步。待以后再次做了总结，再与大家分享。希望大家支持，绝对原创！！！ 一.实验材料 1．菌珠 E.coli DH5α GS115酵母菌 2．质粒 PIC9K/VEGF165重组质粒 3．试剂 NB酵母氮源 G418 gl2、Not1
一，酵母表达系统 毕赤酵母表达系统（invitrogen公司）：分泌型质粒pPIC9K， 宿主菌毕赤酵母GS115 分泌型质粒pPICZalpha （甲醇诱导）宿主菌毕赤酵母x33 分泌型质粒pHIL-S1 二，原核表达质粒 表达宿主菌为BL21(DE3)系列 带His标签（N端）：PET5-(a)氨苄抗性 带His标签（N端）：PET28-(a)卡那抗性 带His标签（C端）：PET24-(b)卡那抗性 带His标签（C端）：PET21
一，酵母表达系统毕赤酵母表达系统（invitrogen公司）：分泌型质粒pPIC9K，宿主菌毕赤酵母GS115分泌型质粒pPICZalpha （甲醇诱导）宿主菌毕赤酵母x33分泌型质粒pHIL-S1二，原核表达质粒表达宿主菌为BL21(DE3)系列带His标签（N端）：PET5-(a)氨苄抗性带His标签（N端）：PET28-(a)卡那抗性带His标签（C端）：PET24-(b)卡那抗性带His标签（C端）：PET21-(a)氨苄抗性带His标签（N端）+TrxA(硫氧还蛋白)：PET-32
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
