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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
负20度
- 保质期:
2年
- 供应商:
钦诚生物
- 规格:
5ug
规格:5ug/管
状态:20%甘油保存
性质参数:K12 (lac-pro), ara, nalr, thi/F'[proAB, lacIq, lacZ M15].
建议:
1. 菌株保存在20%甘油的培养基中,接到菌株后,请挑取菌液在2x YT-N平板(2xYT medium containing 100 μg/ml nalidixic acid)上划线,37℃过夜培养后,再次挑取单个菌落在Minimal Medium 平板上划线,37℃过夜培养后即可使用,以便使纤毛充分表达,利于噬菌体感染;
2. 在Minimal Medium 平板上生长的细菌,不宜在冰箱中放置过久再使用;
3. Minimal Medium plate 配制方法:
Prepare stocks of the following:
1 M MgCl2•6H2O: Dissolve 20.33 g in distilled water to a final volume of 100 ml and autoclave.
1 M CaCl2•2H2O: Dissolve 14.7 g in distilled water to a final volume of 100 ml and autoclave.
1 M thiamine hydrochloride: Dissolve 33.73 g in distilled water to a final volume of 100 ml and sterilize using a 0.22 μm filter.
20% glucose: Dissolve 20 g of D-(+)-glucose (anhydrous) in distilled water to a final volume of 100 ml and sterilize by filtration through a 0.2 μm filter. Do not autoclave.
In a 500 ml bottle, dissolve 6 g of Na2HPO4 (dibasic), 3 g of KH2PO4(monobasic) and 1 g of NH4Cl in distilled water to a final volume of 500 ml. adjust the pH to 7.4 with NaOH.
In a separate 1 liter bottle, add distilled water to 15 g of Bacto-agar to a final Volume of 500 ml. Autoclave both bottles simultaneously to sterilize. Cool both bottles to 50-60°C and combine. Add1 ml of 1 M MgCl2•6H2O, 1 ml of 1 M CaCl2•2H2O, 1 ml of 1 M thiamine hydrochloride and 5 ml of 20% glucose. Pour plates immediately.
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文献和实验短片段(5kb 以内)的序列克隆成功率。对于提高大片段克隆的成功率,可以从以下几方面考虑: ①选择合适的克隆载体,例如 pCC1-Brick 等适合装载大片段的载体; ②选择合适的克隆方法,通常无缝克隆技术如 Gibson 组装或者 Golden Gate 克隆对于大片段的组装效率更高; ③选择合适的纯化方式,纯化目的基因片段和线性化载体片段后再使用,并且注意两者的使用比例; ④选择合适的大肠杆菌感受态细胞,例如 stbl3,JM109 等; ⑤挑选单克隆菌落时需要注意,成功重组大片段的阳性单克隆菌
。 过氧化氢酶试验:滴加3% 过氧化氢试液,若菌落表面有气泡产生,为过氧化氢酶试验阳性,否则为阴性。本菌为阴性反应。 3、需购买试剂: 菌株 培养基及试剂 金黄色葡萄球菌 HB8278革兰氏染色液试剂盒、HB4117 兔血浆、HB0109-7营养琼脂培养基 大肠埃希氏菌 HBIG13 HBI大肠杆菌生化鉴定条、HB8280
。从大肠杆菌里提取原始质粒模板一般都被甲基化的,DpnI 可以将原始野生型质粒模板进行酶切, 而质粒扩增的突变型质粒不能被酶切从而保留下来。4. 最后,将酶切后产物转化入大肠杆菌,通过涂板挑取单克隆菌落后,摇菌测序,这样就可以得到突变基因的质粒啦。
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