- ¥1000
- 钦诚生物
- 上海
- QC1610
- 2025年07月08日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
5ug
基本信息
| 启动子: | CYC1 promoter |
|---|---|
| 复制子: | CEN/ARS (1-2 copies/cell) |
| 终止子: | CYC1 terminator |
| 质粒大小: | 7614bp |
| 原核抗性: | 卡那霉素Kan |
| 克隆菌株: | 大肠杆菌DH5α |
| 培养条件: | 37℃，有氧，LB |
质粒简介
pBT3-STE是一个膜蛋白酵母双杂交质粒。The DUALmembrane system is a yeast-based screening assay to identify and characterize protein-protein interactions between integral membrane proteins,membrane-associated proteins and soluble proteins in their natural setting. When using the DUALmembrane system interactions between full-length integral membrane proteins can be detected in situ at cellular membranes.
质粒图谱
pBT3-STE膜蛋白双杂交质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pBT3-STE膜蛋白双杂交质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验分裂泛素化膜酵母双杂交（MYTH）系统：鉴别蛋白质相互作用的有力工具
完整膜蛋白在基本生物学和临床上的重要性，使得高通量鉴别全长跨膜蛋白质相互作用的酵母双杂交系统得以快速发展，因此我们实验室发提出了分裂泛素化膜酵母双杂交（MYTH）系统。0:00 分裂泛素化膜酵母双杂交（MYTH）系统：鉴别蛋白质相互作用的有力工具 0:21 内容订阅 1:22 内容简介 1:41 选择诱饵和适合的MYTH系统 3:04 用缺口修复生成tMYTH诱饵 3:07 a.制备载体、扩增目的基因 5:30 b.转化酵母、提取诱饵质粒DNA 7:03 确认诱饵 8:10
基因(如ADE2和URA3)，一则它可以允许用比单纯颜色筛选更大的菌落密度铺板，从而获得较丰富的表达产物，二则双重筛选相互验证，可以排除一些假阳性结果；三则转化体制造了大量的融合蛋白以保证基因产物满足生长需要，结果LacZ转录提高，从而β-半乳糖苷酶的活性亦增强。完整的酵母双杂交系统由三个部分组成：与BD融合的蛋白表达载体、与AD融合的蛋白表达载体、带有一个或多个报告基因的宿主菌株。常用的报告基因有HIS3，URA3，LacZ和ADE2等。而菌株则具有相应的缺陷型。双杂交质粒上分别带有不同的抗性基因和营
开始做酵母双杂交了，计划用一个膜蛋白去筛库，已经做好了工作量大，而预期结果要靠点小运气的心理准备，面前真是一条很长的路要走！ 在丁香园学习了很久，希望能将我这次试验过程中遇到的困难和思索记录下来，跟大家一同讨论，共同学习。 今天先说说实验之前的试剂准备，为了保证实验能顺利进行，我选择了clontech的matchmaker gold系统，订购了人脑cDNA文库（标准化的），还有培养基也是订的商品化的，再有一个提酵母质粒的KIT 1，GOLD系统式对系统3的升级版，替换了一个报告
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