- ¥800 - 1500
- 钦诚生物
- 上海
- QC2321
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
负20度
- 保质期：
2年
- 供应商：
钦诚生物
- 规格：
2UG/5UG
| 规格： | 2UG | 产品价格： | ¥800.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 5UG | 产品价格： | ¥1500.0 |
基本信息
| 别名: | NM_010219.4；AL022792; AW208983; FKBP |
|---|---|
| 原核抗性: | 氨苄青霉素Amp |
| 克隆菌株: | 大肠杆菌DH5α |
| 培养条件: | LB培养基，37℃ |
质粒图谱
pSV40-Fkbp4-m小鼠基因质粒使用说明：
1、收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl无菌水溶解质粒，室温放置1min；
2、从-80℃冰箱中取出相应的感受态，置于冰盒上解冻，并做好标记；
3、取2μl质粒加至100μl感受态中，冰浴30min；
4、42℃热激90s，再冰浴2min；
5、加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；
6、6000rpm离心5min，仅留100ul上清混匀菌体沉淀；
7、混匀后的菌液加至对应抗性的LB平板上，倒入适量玻璃珠，涂匀液体；
8、将平板正向培养1h，再倒置培养12h~16h；
9、挑取单克隆菌落至对应抗性的LB液体培养基中，震荡培养12h~16h，根据实验需要提取质粒。
pSV40-Fkbp4-m小鼠基因质粒注意事项：
1、如果您收到的是甘油菌种，请先四区划线，挑取单克隆培养。
2、如果第二天转化平板长的过多，请将质粒按比例稀释后再转化。
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文献和实验相关实验
细胞系等，该细胞有一定自发转化倾向，一般在转染前一天接种细胞，接种密度为2×104 /cm2 ,用含10%胎牛血清的DMEM液，37℃、5%CO2 培养，待细胞占50～70%瓶底面积时，用于转染试验。 (3)DNA-磷酸钙沉淀物的制备 ①将供体细胞DNA和PSV2-neo质粒载体DNA用TE配制成40mg/L的DNA溶液，同时向供体细胞DNA液200μl中加入带基因neo质粒DNA液(20mg/L)220μl和2×HBS 250μl(PSV2-neo为1～2mg/L的使用量)。 ②取500μl上述
验对保真度要求较高，在选择 DNA 聚合酶的时候就需要使用高保真酶，如 Pfu、KOD、Primerstar、Phanta 等。前三者都属于第一代高保真酶，已在市场中广泛使用。诺唯赞科研团队的大力改造生产的 Phanta 系列的高保真酶，保真度达到了 Taq 酶的 50 倍，扩增性能、扩增长度、产量、模板适应性都显著提升。Phanta Max 保真度是 Taq 酶的 53 倍，Pfu 的 6 倍，对于质粒等简单模板有效扩增长度可达 40kb，cDNA 有效扩增长度可达 10kb，基因组有效扩增
了）。 另外，还有一个经济问题：如果一次性制备一批载体（小提一次质粒约80μL），并将之线性化（可双酶切亦可单酶切），然后每次做分子克隆实验时用一点，大约可以做约40次转化，用一年没问题！
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