Rosetta-gami(DE3)pLysS化学感受态细胞

特别提示：包括Rosetta-gami(DE3)pLysS化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Rosetta-gami(DE3)pLysS化学感受态细胞
英文名称：Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cel
产品货号：MQ0044
产品规格：10×100μl/50×100μl

Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株聚合了不同原核表达菌株的优势：
Rosetta-gami赋予其Rosetta和Origami的优点——补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平，并且包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase)(trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基
因，表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。
该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，适合 T7启动子诱导的蛋白表达。
该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素，氯霉素，链霉素，四环素抗性，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
保存条件：-80℃
基因型：
Δ(ara-leu)7697ΔlacX74phoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F[lac+lacIqpro]gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2(CamR，StrR，TetR)
操作说明：
1.取100μl冰上融化的Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42 回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
1.感受态细胞zuì好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少zuì终用于涂板的菌量。
4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白，zuì佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
6.BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。
7.具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。

除了Rosetta-gami(DE3)pLysS化学感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：胚胎裂解液
货号：BTN130806
规格：1mL
本产品是胚胎培养过程中分离单个胚胎细胞的裂解液。可用于分离得到不同时期的胚胎的单细胞，得到的单细胞可用于各种单细胞分析，核酸提取等实验。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：大肠杆菌BL21 Star(DE3)化学感受态细胞
货号：BTN150801
规格：10*100μL
 BL21 Star(DE3)感受态细胞来源于BL21(DE3)菌株，由特殊工艺制作，使用pUC19质粒检测本产品，转化效率可达10⁷cfu/μg。
 BL21 Star(DE3)菌株的特点是含有rne131基因突变体。rne131突变基因能够增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而有效提高蛋白表达能力。本产品主要适用于T7启动子表达载体(如pET 系列)的高水平蛋白表达。
 菌株基因型为：F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm rne131(DE3)。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、LB培养基等。

使用方法：
1.从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 取 100μL冰上融化的BL21 Star(DE3)感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
3. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
4. 向离心管中加入700μL不含抗生素的无菌培养基(LB)，混匀后37℃，200rpm 复苏60分钟。
5. 取100μL左右菌液涂布于含相应抗生素的LB培养基上。如果转化高浓度的质粒，可以减少涂布的量。
6. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。

名称：壮观霉素溶液
货号：BTN131232
规格：10mL
本产品为浓度50mg/mL的壮观霉素溶液。壮观霉素(奇霉素； 放xiàn菌壮观素；actinospectacin)。分子式：C14H24N2O7，分子量：495.35，CAS号：22189-32-8。壮观霉素属于氨基糖苷的抗菌素。与链霉素不同，它不会发生mRNA的误读，但能与细菌的30S核蛋白体结合而阻碍蛋白质的生物合成。在壮观霉素的抗药性菌株，其30S核蛋白体中被称为“S5”的蛋白质可看到有变异。

储存条件：常温运输、4℃避光干燥保存，有效期一年。

名称：C端DsRed标签融合蛋白质粒(红色荧光蛋白)
货号：YT465
规格：1μg
本质粒是哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端含DsRed (Discosoma sp. red fluorescent protein，香菇珊瑚红色荧光蛋白)标签的融合蛋白。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达。在多克隆位点的后面有一个DsRed的完整编码序列，因此在多克隆位点根据阅读框插入目的基因就可以表达C端含有DsRed标签的融合蛋白。利用DsRed的荧光特性可以比较容易地观察融合蛋白的表达水平和细胞内定位，也可以利用DsRed抗体来检测或免疫沉淀融合蛋白。DsRed与GFP没有序列同源性，不能使用GFP抗体检测DsRed。该质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。


本质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
Multiple cloning site	651-740
DsRed	741-1419
T7 promoter and T7 primer binding site	1478-1499
SV40 polyA signal	1511-1894
f1 origin of ss-DNA replication	2032-2338
bla promoter	2363-2487
SV40 promoter	2507-2845
Neomycin/kanamycin resistance ORF	2869-3661
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal	3662-4130
pUC origin	4259-4926

本质粒(4969bp)的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。