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- 2026年01月08日
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晶莱生物
- 服务名称：
ATP/ADP检测
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ATP/ADP检测
1.样品制备。对于悬浮细胞，将10μL培养的细胞（10³-10'）转移到白色不透明的96孔板中。
粘附细胞：在白色不透明微孔板中培养10³-104个细胞。在测定时，在加入90μL ATP试剂之前立即除去培养基（见下文）。
2.ATP测定。将测定缓冲液、底物和共底物置于室温。在冰上或4℃下解冻酶。建议进行FreshReconstitution。将未使用的试剂（包括酶）储存在20°C下。
ATP试剂。对于每个96孔，将95μL测定缓冲液与1μL底物、1μL共底物和1μL ATP酶混合。向每个孔中添加90μL ATP试剂，并通过轻敲平板进行混合。1分钟后，读取铝量计上的发光（RLU A）。
3.ADP测定。制备ADP试剂：对于每个96孔，混合5μL dH₂O与1μL ADP酶作用。
在读取ATP（RLU A）的发光后10分钟，再次读取样品（RLU B）的发光。该测量在测量ADP（即残余ATP信号）之前提供背景。
读取RLU B后，立即向每个孔中添加5μL ADP试剂，并通过轻敲板或上下移液进行混合。1分钟后，在光度计上读取发光（RLU C）。
4.ADP/ATP比值的计算。从RLU C中减去RLU B，然后除以RLU A：RLUC-RLUB ADP/ATP比率=RLU A
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文献和实验Steady State ATPase Assays Coupled Enzyme System
DDW 10 mM Mg・ATP 30 mM PEP 6 mM NADH (Make fresh in 10 mM Tris-OAc pH 7.5, 4.26 mg/mL = 6 mM) PK/LDH (Sigma #P-0294, PK + LDH
的作用是调控基因表达。例如组蛋白甲基化多导致基因沉默，去甲基化则相反；乙酰化一般是转录激活，去乙酰化则相反。当然，也可在此基础上产生复杂的生物学效应。例如组蛋白去乙酰化酶 HDAC 可影响免疫系统；H3K4me3、H3K9me2 能够调控记忆的形成, 而且 H3K 甲基化与 X 染色体失活、基因组印记和异染色质形成有关；H3 乙酰化通过多种机制调控以来 ATP 的染色质重塑 ，并参与炎症反应；H2A、H2B 泛素化则与 DNA 损害反应有关；而 H3S28 磷酸化与 H3K27 乙酰化可激活转录
1.2方法LA采用荧光偏振免疫分析方法，由Abbott公司TDXFPIA(荧光偏振免疫分析仪，编号：18433-94)测定；CK-MB采用荧光免疫分析方法，由AmericanDade公司StratusFIA(荧光免疫分析仪，编号：73669)；ATP，ADP，AMP，CP采用HPLC测定.每组随机选送2例取右心耳心肌组织，戊二醛中固定常规包埋，切片，用JEM-2000EM透射电镜观察。 统计学处理：所有数据用美国统计软件SPSS7.5统计，用均数±标准差（X±s）表示，用配对t检验作比较
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