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小鼠白细胞介素2Mouse IL-2 ELISA KIT(4

8T)
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  • HAKATA
  • XSEJ-02
  • 2025年08月22日
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    小鼠白细胞介素2Mouse IL-2 ELISA KIT(48T) IL-2简介:
    IL-2是一种主要由T淋巴细胞产生的多效性的细胞因子,成熟的鼠IL-2是149个氨基酸的糖蛋白,由169个氨基酸的前体蛋白通过剪切而成为成熟的蛋白。
    IL-2 在抗体刺激引起的不同反应阶段的T细胞,自然杀伤细胞和B细胞的细胞增殖方面起重要的作用,此外,IL-2还可调节γ干扰素、主要组织相容性抗原的表达,刺激活化的B细胞的增殖和分化,提高自然杀伤细胞的活性和抑制粒细胞/巨噬细胞的的增殖。IL-2还可诱导少胶突细胞的增殖和分化。

    小鼠白细胞介素2Mouse IL-2 ELISA KIT(48T)  检测原理:
    本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中小鼠IL-2的浓度。小鼠IL-2捕获抗体已预包被于酶标板上,当加入标本或参考品时,其中的小鼠IL-2会与捕获抗体结合,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗小鼠IL-2抗体后,抗小鼠IL-2抗体与小鼠IL-2接合,形成夹心的免疫复合物,其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合,亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来;其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂,若样本中存在IL-2将会形成免疫复合物,辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质,在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测,读其450nm处的OD值,小鼠IL-2浓度与OD450值之间呈正比,通过参考品绘制标准曲线,对照未知样本中OD值,即可算出标本中IL-2浓度。

    小鼠白细胞介素2Mouse IL-2 ELISA KIT(48T) 
    小鼠IL-2定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:
    组分 规格(96T/48T)
    小鼠IL-2预包被板 12条/6条
    样本分析缓冲液 5ml/3ml
    标准品稀释液 10ml/5ml
    小鼠IL-2标准品 2支/1支(冻干)*
    小鼠IL-2生物素化抗体 10ml/5ml
    亲和素连接的HRP酶 10ml/5ml
    浓缩洗涤液 20× 30ml/15ml
    TMB底物 10ml/5ml
    中止液 5ml/3ml
    封板胶纸 3/2
    说明书 1
    操作步骤:
    1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数,取出所需板条放置在框架内,暂时用不到板条请放回铝箔袋密封,保存于 4℃
    2.建议设置本底较正孔,即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。
    3.分别将标本或不同浓度标准品(100ul/孔)加入相应孔中,用封板胶纸封住反应孔,室温(25~ 28℃ )孵育120分钟。对于血清或血浆标本,请加入50 ul样本分析缓冲液后加50 ul标本,如稀释量大,请将样本与样本分析缓冲液等量加入,不足部分用标准品稀释液补充至100ul。     
    4.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。
    5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔,室温(25~ 28℃ )孵育60分钟。   
    6.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。
    7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔,避光室温(25~ 28℃ )孵育20分钟。
    8.洗板5次,且最后一次置厚吸水纸上拍干。
    9.加入显色剂TMB100ul/孔,避光室温(25~ 28℃ )孵育20分钟。
    10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

    结果判断:
    1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效,复孔的值平均后可作为测量值。
    2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。
    3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标,OD值作纵坐标,以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。
    4.若标本OD值高于标准曲线上限,应适当稀释后重测,计算浓度时应乘以稀释倍数。
    典型数值和参考曲线
     
    浓度pg/ml 典型OD1 典型OD2 OD平均值
    0 0.1099 0.1036 0.10675
    31.25 0.17 0.2098 0.1899
    62.5 0.2563 0.2846 0.27045
    125 0.4362 0.4059 0.42105
    250 0.7677 0.8169 0.7923
    500 1.2286 1.1885 1.20855
    1000 2.0198 1.9421 1.98095
    小鼠IL-2参考标准曲线

    注意:本图仅供参考,应以同次试验标准品所绘标准曲线计算标本含量。

    灵敏度,特异性和重复性:
    1.灵敏度:多次重复结果表明,最小检出量为7.7pg/ml。
    2.特异性:与鼠C10、G-CSF、GM-CSF、IFN-、IL-1、IL-3、IL-5、IL-6、IL-9、IL-13、JE、KC、LIF、M-CSF、MIP-1、MIP-2SCF、TNF、Tpo、VEGF和人IL-2、 IL-2 \Sr等没有交叉反应。
    3.重复性:板内,板间变异系数均<10%.

    参考文献:
    Kuziel and Greene, 1990  J. Invest. Dermatol., 94:275
    Parkinson et al., 1988  J.  Immunol. Methods, 15:105
     

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