通用 miRNA 克隆接头0.83nmol品牌

服务流程：
1）通用 miRNA 克隆接头0.83nmol品牌客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
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储存事项:
A. 通用 miRNA 克隆接头0.83nmol品牌在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. 通用 miRNA 克隆接头0.83nmol品牌组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
实验步骤：
(1) 通用 miRNA 克隆接头0.83nmol品牌实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
Southern 专用 DNA Marker(DIG)20 次  胚胎裂解液1mL
Southern Marker DL2000( 生物素 )20 次  牛血清白蛋白标准品，2mg/mL1mL
Southern Marker DL2000(DIG)20 次  牛血清 γ 球蛋白标准品，2mg/mL1mL
Southern Marker Oligo( 生物素 )20 次  凝胶法内毒素半定量试剂盒10x0.1mL
Southern Marker Oligo(DIG)20 次  凝胶法 miRNA 分离试剂盒
4mL DNA 离心超滤管 (9-15 KD)1个  绿如蓝核酸染料 (UV)0.5mL
4mL DNA 离心超滤管 (30-50 KD)1个  绿如蓝蛋白染液250 次
4mL DNA 离心超滤管 (90-150 KD)1个  绿如兰核酸染料 ( 可见光型 )10mL
4mL DNA 离心超滤管 (150-250 KD)1个  卵巢上皮细胞生长因子5mL
4mL DNA 离心超滤管 (300-500 KD)1个  卵白蛋白标准品，2mg/mL1mL
硫酸链霉素溶液 ,50mg/mL10mL  Southern 级植物 DNAout 10 次
盐酸四环素溶液 ,50mg/mL10mL  Southern 级真菌 DNAout10 次
衣霉素溶液 ,5mg/mL1mL  Southern 级血液 DNAout10 次
盐酸四环素干粉1g  Southern 级细菌 (G+)DNAout10 次
盐酸万古霉素溶液 ,50mg/mL10mL  Southern 级细菌 (G-)DNAout10 次
草菇   耐硼赖酸芽孢杆菌
福氏志贺氏菌   猴头菌
红霉素链霉菌   淡紫色拟青霉
霍乱弧菌   产气夹膜梭菌ATCC 13124
普通变形杆菌AS1.1527冻干粉南京便诊   生孢梭菌   ATCC 19404
反曲毛壳   铜绿假单孢菌
河流弧菌   蛾微杆菌
玫瑰红表面培养基60mm/25cm2   副凝聚短状杆菌
蜡蚧轮枝孢菌   巨大芽孢杆菌
通用 miRNA 克隆接头0.83nmol品牌厚孢根霉   椭圆酿酒酵母
深黄被孢霉   大肠埃希氏菌(大肠杆菌)
改良马丁琼脂培养基70mm   玫瑰红琼脂培养基70mm
桃色欧文氏菌   球毛壳
叶柄粘球菌   枯草芽孢杆菌