小 RNA 克隆试剂盒10 次说明书

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服务流程：
1）小 RNA 克隆试剂盒10 次说明书客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
储存事项:
A. 小 RNA 克隆试剂盒10 次说明书在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. 小 RNA 克隆试剂盒10 次说明书组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
Southern 级细菌 (G-)DNAout10 次  小鼠内皮细胞分离液 1.071200mL
Southern 级细菌 (G+)DNAout10 次  小鼠抗 His 标签单抗100μL
一步式细菌 DNAout50 次  小鼠抗 His 标签单抗1000μL
分枝杆菌 DNAout50 次  小鼠抗 Flag 标签单抗100μL
柱式分枝杆菌 DNAout50 次  小牛胸腺 DNA 溶液1mL
0.5mL DNA 离心超滤管 (9-15 KD)1个  氯霉素溶液 ,25mg/mL10mL
0.5mL DNA 离心超滤管 (30-50 KD)1个  氯霉素干粉1g
0.5mL DNA 离心超滤管 (90-150 KD)1个  绿如蓝染料，PCR 级1mL
0.5mL DNA 离心超滤管 (150-250 KD)1个  绿如蓝染料，PCR 级0.1mL
0.5mLDNA 离心超滤管 (300-500 KD)1个  绿如蓝核酸染料 (UV)1.5mL
硫酸葡聚糖1g  即用型荧光定量 RT-PCR 试剂盒300 次
聚乙二醇100g  即用型荧光定量 PCR 试剂盒600 次
酪蛋白50g  即用型荧光定量 PCR 试剂盒100 次
脱脂奶粉 ( 杂交专用 )50g  即用型易错 PCR 试剂盒100 次
即用型封堵液 (NC 专用 ) 50mL  即用型热启动 PCR 试剂盒1.5mL
苍白芽孢杆菌   英诺克李斯特氏菌
鳆发光杆菌   乙型副伤寒沙门氏菌
多主枝孢   岛青霉
藤黄八叠球菌   变异链球菌  对红霉素、利福平、利福霉素AMP、壮观霉素、链霉素敏感。血清型C。
酱油曲霉   斯氏梭菌  产
反曲毛壳   大孢绿僵菌=金龟子绿僵菌大孢变种 Metarhizium majarosporae= anisopliae var. majus
干酷乳杆菌   叶柄粘球菌
苏云金芽胞杆菌幕虫亚种Bacillusthuringiensissubsp.finitimus   泡盛曲霉
炭球菌   深黄被孢霉
干燥棒杆菌   李克犁头霉或伞枝梨头霉
小 RNA 克隆试剂盒10 次说明书厚孢根霉   佛罗里达无孢子侧耳
嗜盐细菌属   营养琼脂培养基200ml
李克犁头霉（伞枝梨头霉）   诺尔斯氏链霉菌
生孢梭菌冻干粉   产气肠杆菌
调料葡萄球菌   菅囊酵母
实验步骤：
(1) 小 RNA 克隆试剂盒10 次说明书实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)