40014 大量全血基因组DNA提取试剂盒(溶液型）32次X

Blood Genomic DNA Maxi Kit

大量血液基因组 DNA 提取试剂盒

（溶液型）

 

目录号:40014

产品内容：

产品成份	40014-32 （32 x10ml）	40014-96 （96 x10ml）
10x 红细胞裂液	100 ml	300 ml
细胞核裂解液	180 ml x2	250 ml x4
蛋白沉淀液	110 ml	330 ml
DNA 溶解液	30 ml	90 ml

自备试剂：

异丙醇、70％乙醇

保存条件：

室温（15~25℃）

产品简介：

适用于从新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液样本中快速提取高质量的基因组DNA，也可以提取白膜层和血凝块。

首先红细胞裂解液裂解去除不含DNA的红细胞，细胞核裂解液裂解白细胞释放出基因组DNA， 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。

产品特点：

1.  简便快速：30 min 内可获得高纯度的基因组 DNA。

2.  安全无毒：无需苯酚/氯仿抽提。

3.  高产：典型的产量 10 ml 全血可提取出 150～500µg 基因组 DNA。

4.   高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达 50～150 kb，可直接进行可直接用于构建文库、PCR、、酶切、Southern-blot 等分子生物学实验。

注意事项：

1.  本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血，如 EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬，影响裂解效果，建议选用非肝素的抗凝剂收集血液标本。

2.   为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。

3.  不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，血液DNA产量的个体差异也可能非常大。

4. 如果结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。

5.   本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量（20µl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。

6.  DNA溶解液是TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），长期保存DNA，但是EDTA可能下游酶切反应，使用时可以适当稀释。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。

操作步骤：

使用前，请先用去离子水将 10x 红细胞裂解液稀释 10 倍到 1x。

1.  吸取 30 ml 1x 红细胞裂解液到一个 50 ml 离心管。

2.  将抗凝全血（使用前恢复至室温）颠倒混匀后，吸取 3 ml 加到上一步装有红细胞裂解液的离心管中，颠倒 6-8 次，并倒置轻弹管壁，确保充分混匀。

3.  室温放置 10 min（期间应该颠倒轻弹，混匀数次帮助裂解红细胞）。
  4.2,500 xg 离心 2 min，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清，留下完整的管底白细胞团和大约 100 μl 的残留上清。

注意：离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入适量红细胞裂解液重悬细胞团后，重复步骤 3，4。

5. 涡旋振荡直到白细胞团充分重悬、分散。

注意：白细胞的重悬分散对下一步裂解非常重要，白细胞未打散就加入细胞核裂解液，会导致白细胞不能充分裂解，形成肉眼可见团块。
6. 加入 10 ml 细胞核裂解液到重悬的白细胞，上下吹打裂解白细胞，或者剧烈涡旋 10 sec 帮助裂解白细胞。
7. (可选步骤，一般不需要) 在裂解物中加入 RNase A（10 mg/ml）至终浓度 30 μg/ml，颠倒 25 次混匀，37℃温育 15 min 去除残留 RNA，然后冷却回室温。
8.  加入 3.33 ml 蛋白沉淀液后，涡旋振荡 25 sec, 充分混匀，可能见到一些小的蛋白团块。
9. 2,500 xg 离心 5 min。这时候应该可以见到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。

10.  小心吸取上清（大约 10 ml）到一个新的 50 ml 离心管中。

注意：吸取上清时，注意不要吸到管底和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心 2 min 后取上清。
11.  加入等体积的室温异丙醇（10 ml），轻柔颠倒 30 次混匀或者直到出现棉絮状（丝状）白色 DNA 沉淀。

12.2,000 xg 离心 3 min，在管底可以见到白色 DNA 沉淀块，倒弃上清。
  13. 加入 10ml 70％乙醇，颠倒几次漂洗 DNA 沉淀，2,000 xg 离心 1 min，倒去上清（注意不要把 DNA 沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。

注意：不要干燥过头，否则 DNA 极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。
14.   加入 600μl DNA 溶解液重新溶解DNA 沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在 65℃温育 30-60 min（不要超过一小时），期间不时的轻弹管壁帮助重新水化 DNA。也可以在室温或者 4℃放置过夜来重新水化 DNA。

15.   DNA 可以存放在 2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

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