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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
60
- 英文名：
一站式 TA 克隆试剂盒 ( 含感受态 )
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
20 次
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
点击了解更多“克必隆”克隆及表达产品：
一站式 TA 克隆试剂盒 ( 含感受态 )20 次品牌详细介绍：
公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列，5000余种产品
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
以下是一站式 TA 克隆试剂盒 ( 含感受态 )20 次品牌的相关产品：
SDS-PAGE 分离胶配胶液500mL LY294002(PI3K 抑制剂 )1mg
SDS-PAGE 上样液，5×1mL Lucigenin( 光泽精 )10mg
SDS-PAGE 上样液，5×10mL LPS(TLR4 激活剂 )0.5mg
SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )5L Lovastatin(HMG-CoA Reductase 抑制剂 )10mg
SDS-PAGE 电泳液 ( 干粉 )20L L-NMMA( 总 NOS 抑制剂 )5mg
分子生物学级糖原干粉1.0g 脑膜细胞生长因子5mL
分子生物学级糖原溶液，10mg/mL1mL 木瓜蛋白酶抑制剂溶液，0.5 mg/mL10mL
微量核酸沉淀剂10mL 木材 DNAout50 次
超快非醇核酸沉淀剂30 次 膜结合 DNA 清除试剂盒50 次
超快非醇核酸沉淀剂100 次 明胶溶液，2%，PCR 级1.5mL
内皮细胞生长因子5mL DTT，蛋白级5g
脑膜细胞生长因子5mL Doxorubicin(Adriamycin) 阿霉素100μL
尿道上皮细胞生长因子5mL dNTP 溶液，2.5mM5mL
平滑肌细胞生长因子5mL dNTP 溶液，2.5mM0.5mL
平滑肌细胞生长因子 ( 不含血清 )5mL dNTP 溶液，100mM 5mL
不动杆菌属 戴尔根霉
胰蛋白胨大豆琼脂表面培养基60mm/25cm2 齿双歧杆菌
香蕉炭疽盘长孢菌 炭球菌
乙酸钙不动杆菌 多型孢毛霉
尖鳞黄伞 苏云金芽胞杆菌山东亚种Bacillusthuringiensissubsp.shandongiensis
发酵性酵母 草菇
天蓝色链霉菌 福氏志贺氏菌
田菁根瘤菌 杜鹃盘多毛孢霉 Pestalotia rhododendri
木醋杆菌 石刁柏(芦笋)拟茎点霉 Phomopsis asparagi
肺炎链球菌ATCC49619冻干粉 烟草疫霉* Phytophthora nicotianae
一站式 TA 克隆试剂盒 ( 含感受态 )20 次品牌红色红曲霉 泡盛曲霉
头状秃马勃 椭圆酿酒酵母 葡萄酒生产用菌
发酵性酵母 椭圆酿酒酵母 由AS2.346酵母育成,高温型水果酒酵母
侵蚀侏儒囊菌 肺形侧耳、柳树菌、树窝 食用
硫乙醇酸盐流体培养基40ml 玫瑰红琼脂培养基70mm
操作步骤:
1. 一站式 TA 克隆试剂盒 ( 含感受态 )20 次品牌匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
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文献和实验PCR产物的TA克隆 (DNA的胶回收和连接) 【实验目的】 1.掌握DNA回收和连接的基本原理。 2.学习和掌握PCR产物的T-vector克隆。 【实验
3`-T突出端的载体用于直接高效地连接PCR产物。系统中也包含感受态细胞和S.O.C培养基, 使得实验操作更为简单方便。所以TA克隆不需使用含限制酶序列的引物，不需将PCR产物进行优化，不需把PCR产物做平端处理（Invitrogen另有平端载体供高确限度酶克隆）。不需在PCR扩增产物上加接头，即可直接进行克隆。图32 The TA Cloning® ConceptTopo TA克隆方法（Topo TA Cloning Kit）Topo TA克隆原理与TA克隆一样，唯一不同的是TA克隆用的是T
现象可能原因解决方案 转化后无菌落生长 感受态细胞已经失效用pUC18质粒进行转化，确认细胞的感受态效率。1ng pUC18质粒至少应得到1000个以上的转化子。如有问题，重新制备感受态细胞。 平板所用抗性不对pBS-T载体为amp抗性，工作浓度 100 ug/ml 连接中使用了不恰当的vector:insert 比例估计PCR产物的量，将vector:insert比例限制在3:1到 1:5的范围内。对于极小的PCR产物进行克隆，很可能因为PCR产物严重过量，导致无菌落或菌落极少。 白色
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