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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
51
- 英文名：
LBA4404 农杆菌感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10×100μL
1）LBA4404 农杆菌感受态细胞10×100μL说明书客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
以下是LBA4404 农杆菌感受态细胞10×100μL说明书的详细介绍点击了解更多“克必隆”克隆及表达产品：
储存事项:
A. LBA4404 农杆菌感受态细胞10×100μL说明书在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. LBA4404 农杆菌感受态细胞10×100μL说明书组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
实验步骤：
(1) LBA4404 农杆菌感受态细胞10×100μL说明书实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
RNA 级 GuSCN( 异硫酸胍 )100g 真空抽滤盒1套
RNA 级 b-Mercaptoethanol(2- )50mL 真菌总蛋白质微量提取试剂盒50 次
RNA 级 Oligo(dT) 纤维素25mg 真菌种属鉴定 PCR Mix 7100 次
RNA 级 PVP K30( 聚乙烯基烷酮 K30) 100g 真菌种属鉴定 PCR Mix 6100 次
RNA 级 Sarkosyl( 月桂酰 -N- 甲基氨基乙酸 ) 100g 真菌种属鉴定 PCR Mix 5100 次
SYBR Green II 核酸染料100 μL 人中性粒细胞分离液 1.085200mL
电泳级耐热型 SYBR 染料50μL 人胰岛细胞分离液 1.056200mL
绿如蓝核酸染料 (UV)0.5mL 人内皮细胞分离液 1.060200mL
绿如蓝核酸染料 (UV)1.5mL 人淋巴细胞分离液 1.077200mL
绿如兰核酸染料 ( 可见光型 )10mL 人淋巴细胞分离液 1.077(FICOLL 配置 ) 200mL
噻孢霉素溶液 ,100mg/mL1mL TCEP 盐酸膦1g
先锋霉素溶液 ,100mg/mL1mL TCEP 溶液，0.5M5mL
氯霉素干粉1g TBE 电泳液 ,10×250mL
氯霉素溶液 ,25mg/mL10mL TBE 电泳液 ,10×2500mL
环孢霉素 A 溶液 ,10mg/mL1mL TB1 感受态细胞10×100μL
表面培养基60mm/25cm2 白色链霉菌
微黄八叠球菌 坏死梭杆菌坏死亚种
苍白芽孢杆菌 金黄色葡萄球菌ATCC29213冻干粉
灰树花 木霉
肺炎链球菌 砖红链霉菌
多主枝孢 尖镰孢
藤黄八叠球菌 硫乙醇酸盐流体培养基100ml
金黄色葡萄球菌冻干粉 荧光假单胞菌
粗糙链孢霉 头状秃马勃
解肝磷脂土地杆菌 平展米曲霉(米曲霉平展变种)
LBA4404 农杆菌感受态细胞10×100μL说明书红串红球菌 苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae
白色念珠菌冻干粉 园弧青霉=桔灰青霉
杂色曲霉 松生拟层孔菌
深红红螺菌 地衣芽孢杆菌
藤黄色链霉菌 Oceanicolabatsensis 模式菌株
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文献和实验相关专题 DNA连接与转化 农杆菌感受态细胞的制备 1.挑取少许农杆菌LBA4404，接种于5ml LB液体培养基 (含50mg/L STR)中，28℃、200r/mim培养过夜。 2.取2ml培养物于LB液体培养基 (含50mg/L STR) 中继续培养，直至OD800 为0.5左右。 3.将培养物置冰浴中30min，4℃、5000r/min、离心5min，弃去上清液。 4.用10ml冷
，轻轻悬浮细胞，冰上放置20min。4℃5000rpm离心5min，去上清。 1.1.6. 加入4ml预冷的含15%甘油的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮。 1.1.7. 农杆菌悬浮液分装于无菌Eppendorf管中，每管200μl冻存于-70℃。 1.2. 双元载体转化农杆菌EHA105 取1μg左右的质粒DNA加入到200ml EHA105感受态细胞中，混匀后，冰浴30min，-70℃放置10min 。再在37℃水浴5min或42℃水浴1min，接着冰浴2min，加入800mlYM
情况下用大约 20～30 单位的酶大约 3 小时可以酶切完全。酶切后我们建议用琼脂糖凝胶回收线性化载体。将回收后的线性化载体定量，通常线性化载体的工作浓度为 50～100ng/μl。连接用水将退火后双链寡核苷酸 (10 μM) 稀释 100 倍备用。连接反应体系：T4 DNA 连接酶 5UEcoRV 5U线性化载体 2 μl稀释 100 倍后双链寡核苷酸 1 μl10× 连接酶 Buffer 1 μl50% PEG4000 1 μl加水补足 10 μl反应条件： 22℃ 30 min， 37℃ 15
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