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- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
30
- 英文名：
Rosetta-gami(DE3) 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
0.1mL×10
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
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Rosetta-gami(DE3) 感受态细胞0.1mL×10费用详细介绍：
公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列，5000余种产品
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
以下是Rosetta-gami(DE3) 感受态细胞0.1mL×10费用的相关产品：
IPTG 溶液，200mg/mL1.5mL Trichostatin A(HDAC 抑制剂 )100μg
X-Gal 干粉0.5g Trequinsin(PDE III 抑制剂 )2mg
X-Gal 溶液，20mg/mL10mL Top10 化学感受态细胞0.1mL×10
免质粒提取筛选试剂盒1000 次 Tocopherol( 抗氧化剂 )2g
可溶性两性霉素 B 溶液 ,20mg/mL1mL TMRE25mg
土壤 DNAout30 次 小胶质细胞生长因子5mL
土壤 DNAout100 次 小 RNA 克隆试剂盒10 次
柱式土壤 DNAout50 次 硝酸纤维素膜，13×20cm1张
大提柱式土壤 DNAout4次 硝酸纤维素膜，13×20cm1张
柱式水样 DNAout50 次 消解酶 ( 溶细胞酶 ) 干粉100mg
细菌膜蛋白质微量提取试剂盒50 次 Rosetta-gami(DE3) 感受态细胞0.1mL×10
磷酸化蛋白纯化试剂盒50 次 Rosetta(DE3)pLysS 感受态细胞0.1mL×10
糖蛋白蛋白纯化试剂盒50 次 Rosetta(DE3) 感受态细胞0.1mL×10
脂蛋白纯化试剂盒50 次 Rosetta 感受态细胞10×100μL
细胞表面蛋白分离试剂盒8次 RNase-free 异硫酸胍溶液 ,5M100mL
拜氏梭菌 齿双歧杆菌 模式菌株
黑曲霉菌AS.3.3928冻干粉南京便诊 粘性
绿色木霉 植物乳杆菌植物亚种 模式菌株。质量控制
威尔氏李斯特菌 大肠杆菌 Escherichia coli
香蕉炭疽盘长孢菌 平盖灵芝（树舌）
顶青霉 肺形侧耳、柳树菌、树窝
大肠杆菌Escherichiacoli 弯曲芽孢杆菌
改良月桂基盐胰蛋白胨肉汤-万古酶素10ml 30 支/盒 总状毛霉
平盖灵芝(树舌) 0.1%蛋白胨水溶液100ml
食酸菌 水螺菌
Rosetta-gami(DE3) 感受态细胞0.1mL×10费用哈氏弧菌 构巢曲霉
胰蛋白胨大豆琼脂表面培养基(二)60mm洗必泰、季铵盐类消毒剂的消毒过的物表 烟曲霉
荨麻青霉 霉 共110株(略)
婴儿双歧杆菌 硫乙醇酸盐平板培养基70mm
灭蚊链霉菌 弗氏柠檬酸杆菌
操作步骤:
1. Rosetta-gami(DE3) 感受态细胞0.1mL×10费用匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
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文献和实验2系列，thioredoxin reductase (trxB)和glutathione reductase (gor)两条主要还原途径双突变菌株，显著提高细胞质中二硫键形成几率，促进蛋白可溶性及活性表达。（卡那霉素敏感）Rosetta-gami™ 2 则是综合上述两类菌株的优点，既补充7种稀有密码子，又能够促进二硫键的形成，帮助表达需要借助二硫键形成正确折叠构象的真核蛋白。（卡那霉素敏感）Origami B 是衍生自 lacZY突变的 BL21菌株，这个突变能根据IPTG的浓度精确调节表达
霉素抗性质粒） 当要表达的蛋白质需要形成二硫键以形成正确的折叠时，可以选择K–12衍生菌Origami 2系列， thioredoxin reductase (trxB) 和glutathione reductase (gor)两条主要还原途径双突变 菌株，显著提高细胞质中二硫键形成几率，促进蛋白可溶性及活性表达。（卡那霉素敏感） Rosetta-gami™ 2 则是综合上述两类菌株的优点，既补充7种稀有密码子，又能够促进二硫键的形成，帮助表达需要借助二硫键形成正确折叠
-70℃保种.但是要注意高浓度甘油(> 10%)会导致质粒不稳定.请尽量保持甘油浓度8%.(15%浓度的甘油保种液和新鲜菌液1:1就行) 2、重组质粒不宜长期保存于表达菌株(带DE3的大肠杆菌)中,请尽量使用带有recA endA突变的克隆菌株(比如C600,DH5a)进行质粒抽提和保存质粒.表达型的菌株提质粒经常会有质量不高或者背景的问题.特别是大量抽提. 其实不仅仅是表达,建库克隆都会涉及菌株的不同要求,推荐看看以下文章：克隆/建库专用超级高效感受态细胞 .感受态不是目的
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