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- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
48
- 英文名：
AGL1 农杆菌感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10×100μL
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
点击了解更多“克必隆”克隆及表达产品：
AGL1 农杆菌感受态细胞10×100μL品牌详细介绍：
公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列，5000余种产品
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
以下是AGL1 农杆菌感受态细胞10×100μL品牌的相关产品：
Rhod-2，三盐1mg DEPC 水100mL
Rhodamine1235mg Denhardt 溶液，50×100mL
SPQ(6- 甲氧基 -N-(3- 磺丙基 ) )25mg Denhardt 溶液，50×100mL
TMRE25mg Decitabine 地西他滨5mg
TSQ(6- 甲氧基 -(8-p- 甲苯磺酰胺 ) 25mg Deaza dGTP0.4mL
DNA 上样液 ( 红 ),6×10mL 十二烷基磺酸100g
DNA 上样液 ( 蓝 ),6×10mL 生物素标记 dUTP 溶液50μL
DNA 上样液 ( 红 ),6×( 非甘油 )10mL 肾系膜细胞生长因子5mL
DNA 上样液 ( 蓝 ),6×( 非甘油 )10mL 神经元生长因子5mL
三合一 RNA 上样液 ( 含 EB) 1.5mL 少突胶质细胞生长因子5mL
十二烷基磺酸清除剂25mL MM1-43(FM®1-43)1mg
β- ，蛋白级10mL Mito-Tracker Green( 线粒体绿色荧光探针 )50μL
DTT，蛋白级5g miRNA 荧光定量检测试剂盒25 次
DTT，免称量蛋白级48 管 miRNA 尿素 -PAGE 上样液 ,6×10mL
TCEP 盐酸膦1g miRNA 尿素 -PAGE 上样液 ,6×1.5mL
变绿粘球菌 干酷乳杆菌
硫乙醇酸盐流体培养基100ml 藤黄色链霉菌
平展米曲霉(米曲霉平展变种) 浑浊红球菌
荧光假单胞菌 白色念珠菌CMCC98001冻干粉南京便诊
田菁根瘤菌 苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种
多型孢毛霉 宋氏志贺氏菌
苏云金芽胞杆菌山东亚种Bacillusthuringiensissubsp.shandongiensis 福氏志贺氏菌
结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂90mm 10 个/包 干酪棒杆菌（乳酪棒杆菌）
蜜环菌 生孢梭菌（产芽孢梭状芽孢杆菌）
马红球菌 拟热带假丝酵母
AGL1 农杆菌感受态细胞10×100μL品牌黑曲霉菌冻干粉 Georgeniamuralis
阿尔莱特葡萄球菌 华美链霉菌
越南伯克霍尔德氏菌 谢氏杆菌
滑菇、光帽黄伞 掷抱酵母
多主枝孢（蜡叶芽枝霉） 香港洛克氏菌
操作步骤:
1. AGL1 农杆菌感受态细胞10×100μL品牌匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
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文献和实验，轻轻悬浮细胞，冰上放置20min。4℃5000rpm离心5min，去上清。 1.1.6. 加入4ml预冷的含15%甘油的0.1M的CaCl2溶液，轻轻悬浮。 1.1.7. 农杆菌悬浮液分装于无菌Eppendorf管中，每管200μl冻存于-70℃。 1.2. 双元载体转化农杆菌EHA105 取1μg左右的质粒DNA加入到200ml EHA105感受态细胞中，混匀后，冰浴30min，-70℃放置10min 。再在37℃水浴5min或42℃水浴1min，接着冰浴2min，加入800mlYM
情况下用大约 20～30 单位的酶大约 3 小时可以酶切完全。酶切后我们建议用琼脂糖凝胶回收线性化载体。将回收后的线性化载体定量，通常线性化载体的工作浓度为 50～100ng/μl。连接用水将退火后双链寡核苷酸 (10 μM) 稀释 100 倍备用。连接反应体系：T4 DNA 连接酶 5UEcoRV 5U线性化载体 2 μl稀释 100 倍后双链寡核苷酸 1 μl10× 连接酶 Buffer 1 μl50% PEG4000 1 μl加水补足 10 μl反应条件： 22℃ 30 min， 37℃ 15
人外周血单细胞悬液制备流程 1.采集人外周血样本于抗凝管中。 离心管内加入100 μL新鲜血和2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃裂解10 min。 300 g离心5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清，得到白色细胞沉淀。 PBS洗涤一次。 加入100 μL细胞染色缓冲液重悬细胞，不用计数，即可进行后续流式抗体染色实验。按照100 μL新鲜血样本制备的单细胞悬液，加入1 Test对应的流式抗体混匀进行后续实验。 注意事项： 1. 采血用抗凝管，有肝素和EDTA两种
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