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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
44
- 英文名：
TB1 感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
10×100μL
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
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TB1 感受态细胞10×100μL品牌详细介绍：
操作步骤:
1. TB1 感受态细胞10×100μL品牌匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
实验要点：
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
以下是TB1 感受态细胞10×100μL品牌的相关产品：
PCR Mix 染料10mL 分子杂交炉1台
可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制剂0.3mL 分子生物学级糖原溶液，10mg/mL1mL
Taq 酶抗体250U 分子生物学级糖原干粉1.0g
Taq 酶抗体1000U 分枝杆菌 RNAout50 次
DNA 修复混合液 30 次 分枝杆菌 DNAout50 次
羧基磁珠2mL 溶液 ,50mg/mL1mL
环氧基磁珠2mL 髓核细胞生长因子5mL
醛基磁珠2mL 随机引物法 DNA 探针生物素标记试剂盒5次
巯基磁珠 2mL 随机引物法 DNA 探针标记试剂盒5次
壳聚糖磁珠2mL 酸洗玻璃珠系列10g
陶瓷研钵 ( 直径 60 mm)1个 真菌 RNAout250 次
陶瓷研钵 ( 直径 75 mm)1个 真菌 DNAout50 次
真空抽滤盒1套 长效期 SDS-PAGE 上样液1mL
第二章 “天净沙”DNA纯化产品 长效期 SDS-PAGE 配胶液200mL
非冻型血液 DNA 保存液100mL 长效期 SDS-PAGE 还原剂10mL
贝雷丝孢酵母 单孢虫道酵母 Ambrosiozyma manospora
平展米曲霉（米曲霉平展变种） 苏云金芽胞杆菌苏云金变种 Bacillus thuringeinsis subsp. thuringeinsis
生孢梭菌冻干粉 天蓝色链霉菌
棉花立枯菌 多型孢毛霉
伴放线放线杆菌 发酵性酵母
多头霉 小金色链霉菌 Streptomyces microaureus
苏云金芽胞杆菌蜡螟亚种 Bacillus thuringiensis subsp. galleriae 苏云金芽胞杆菌库尔斯塔克亚种 Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki
产黄青霉 斑褶菇
杏鲍菇 戴尔根霉
灰色链霉菌 两型孢毛霉
TB1 感受态细胞10×100μL品牌黑曲霉菌AS.3.3928冻干粉 异常汉逊酵母
德氏乳杆菌保加利亚亚种 登佐链霉菌
珊瑚链霉菌 地生翅孢壳
贝形侧耳、鹰翅菌 生孢梭菌冻干粉
西伯利亚库特氏菌 放射性根瘤菌
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文献和实验情况下用大约 20～30 单位的酶大约 3 小时可以酶切完全。酶切后我们建议用琼脂糖凝胶回收线性化载体。将回收后的线性化载体定量，通常线性化载体的工作浓度为 50～100ng/μl。连接用水将退火后双链寡核苷酸 (10 μM) 稀释 100 倍备用。连接反应体系：T4 DNA 连接酶 5UEcoRV 5U线性化载体 2 μl稀释 100 倍后双链寡核苷酸 1 μl10× 连接酶 Buffer 1 μl50% PEG4000 1 μl加水补足 10 μl反应条件： 22℃ 30 min， 37℃ 15
人外周血单细胞悬液制备流程 1.采集人外周血样本于抗凝管中。 离心管内加入100 μL新鲜血和2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃裂解10 min。 300 g离心5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清，得到白色细胞沉淀。 PBS洗涤一次。 加入100 μL细胞染色缓冲液重悬细胞，不用计数，即可进行后续流式抗体染色实验。按照100 μL新鲜血样本制备的单细胞悬液，加入1 Test对应的流式抗体混匀进行后续实验。 注意事项： 1. 采血用抗凝管，有肝素和EDTA两种
小鼠外周血单细胞悬液制备 采集小鼠外周血样本于抗凝管中。 离心管内加入 100 μL 新鲜血，加入 1 Test 对应流式抗体，混匀，4℃ 避光孵育 30 min。 加入 2 mL 1×红细胞裂解液，混匀，4℃ 裂解 5 min。 300 g 离心 5 min（裂解完立即离心，防止时间过长损伤细胞），弃上清可得到白色的细胞沉淀。 PBS 洗涤一遍。 加入 200 μL 细胞染色缓冲液重悬细胞，用流式细胞仪进行检测和分析。 注意事项： 采血用抗凝管，有肝素和 EDTA 两种，若直接裂解
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