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- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
25
- 英文名：
BL21(DE3)pLysS 化学感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
0.1mL×10
公司的RNA/DNA提取目录有下面10个系列，5000余种产品
1、RNA纯化系列产品
2、DNA纯化系列产品
3、电泳及回收系列产品
4、探针标记及检测系列产品
5、核酸扩增系列产品
6、克隆表达系列产品
7、基因组研究系列产品
8、蛋白质研究系列产品
9、细胞生物学研究系列产品
10、即用型溶液、质粒库、菌种库等等
以下是BL21(DE3)pLysS 化学感受态细胞0.1mL×10规格的相关产品：
GST 固定试剂盒1套 MG-132(Proteasome 抑制剂 )1mg
谷胱甘肽 S 转移酶1mg Metformin(LKB1-AMPK 激活剂 )1g
核酸清除剂1.5mL MEQ，(6- 甲氧 -N- )100mg
非变性法蛋白沉淀试剂盒10 次 m7G(5´)ppp(5´)G 帽结构类似物25 OD
微量蛋白沉淀试剂盒50 次 m7G(5´)ppp(5´)A 帽结构类似物25 OD
大提柱式真菌 DNAout4次 盐酸四环素干粉1g
百万碱基级真菌 DNAout10 次 盐酸胍溶液，8M200mL
Southern 级真菌 DNAout10 次 亚氨二乙酸介质10mL
大提柱式酵母 DNAout4次 血液线粒体和核 DNA 双提试剂盒 25 次
柱式动物线粒体 DNAout，PCR 级50 次 血液和 DNA 纯化套装100 次
血清白蛋白清除剂15 次 M15 感受态细胞0.1 mL×10
免疫蛋白清除剂20 次 M13mp18DNA10μg
SDS-PAGE 预制胶12 块 M13mp18DNA10μg
一站式 SDS-PAGE 电泳套装30 次 M13 噬菌体单链基因组 DNAout50 次
SDS-PAGE 浓缩胶配胶液500mL Lyso-Tracker Red( 溶酶体红色荧光探针 )50μL
白色念珠菌冻干粉 双孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)
粉红单端孢霉 泡盛曲霉
三七根腐病菌 Cylindrocarpon sp. 叶柄粘球菌
小被孢霉 匍匐放射毛霉或雅致放线毛霉
皱木耳 嗜热脂肪芽孢杆菌冻干粉
点头根霉 荨麻青霉
鼠伤寒沙门氏菌 假单胞杆菌
双孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇) 冰核细菌
威尔酵母 长根菇(长根奥德磨)
叶柄粘球菌 皂味口磨
BL21(DE3)pLysS 化学感受态细胞0.1mL×10规格过渡原囊菌 赖酸脱羧酶试验培养基2ml 30 支/盒
改良马丁琼脂培养基200ml 斑褶菇
厚孢根霉 掘氏疫霉
嗜盐细菌属 立枯丝核菌
生孢梭菌冻干粉 台湾根霉
操作步骤:
1. BL21(DE3)pLysS 化学感受态细胞0.1mL×10规格匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞，每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml，用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c．细胞悬液 离心收集细胞，每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol，反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2．将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：如样品中含有较多蛋白质，脂肪，多糖或胞外物质（肌肉，植物结节部分等）可于2-8℃10000×g离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜，多糖，高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。
7. 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml，室温放置10分钟。
8. 2-8℃10000×g离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。
实验要点：
1．CTAB 溶液在低于15℃时会析出沉淀，因此在将其加入冷冻的植物材料中之前必须预热。
2．在最适条件下，DNA—CTAB 沉淀呈白色纤维状，很容易一下子就从溶液中钩出。不过，某些植物种的DNA 沉淀中可能含有杂质，特别是多糖，使DNA 沉淀呈絮状或胶状，这种情况下可能需要稍事离心才能得到DNA. —CTAB 沉淀。
3．饱和酚虽然可有效地使蛋白质变性，但酚不能完全抑制RNA 酶的活性,而且酚可以溶解含poLy(A)的mRNA。如果用和氯仿的混合液，可减轻这两种现象，同时可加入适量的（—氯仿—=25:24:1），的作用是消泡，并使蛋白质层紧密，使水相和有机相分层较好。 细菌的培养和收集 将含有质粒pBS 的DH5α菌种接种在LB 固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24 小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB 液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12 小时至对数生长后期。小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA 十分有用。这些方法共同特点是简便、快速，能同时处理大量试样,所得DNA 有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要
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文献和实验） 3：BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr 4：JM109菌株 该菌株在使用pUC系列
） 3：BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3，pLysS ，Camr 4：JM109菌株 该菌株在使用pUC系列
【交流】转载：JM109，DH5a，BL21这些感受态有何区别
子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ 噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT， hsdS（rBB-mB－），gal， dcm（DE3） 3：BL21(DE3) pLysS菌株 该菌株含有质粒pLysS，因此具有氯霉素抗性。PLysS含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰目的蛋白的表达。该菌适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。 基因型：F-，ompT hsdS（rBB-mB－
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