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- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
22
- 英文名：
Top10 化学感受态细胞
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
0.1mL×10
1）Top10 化学感受态细胞0.1mL×10费用客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
以下是Top10 化学感受态细胞0.1mL×10费用的详细介绍点击了解更多“克必隆”克隆及表达产品：
储存事项:
A. Top10 化学感受态细胞0.1mL×10费用在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. Top10 化学感受态细胞0.1mL×10费用组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
实验步骤：
(1) Top10 化学感受态细胞0.1mL×10费用实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
Fluorescein-12-dUTP 溶液，1mM25μL 酵母化学感受态细胞制备试剂盒20 次
Cy3-dCTP 溶液，10mM25μL 酵母化学感受态细胞制备试剂盒 ( 含转化液 )20 次
Cy5-dCTP 溶液，10mM25μL 酵母电转感受态细胞制备试剂盒20 次
柱式探针纯化试剂盒10 次 酵母蛋白酶抑制剂1mL
Sephadex G50 介质10mL 酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )1.5mL
一管式植物 DNAout500 次 一步法96 孔板单菌落质粒DNAout( 真空法)1次
中草药 DNAout20 次 一步法96 孔板单菌落质粒DNAout( 离心法)5次
中草药 DNAout100 次 一步法96 孔板单菌落质粒DNAout( 离心法)1次
柱式植物油 DNAout50 次 一步法 96 孔板质粒 DNAout( 真空法 )1次
木材 DNAout50 次 一步法 96 孔板质粒 DNAout( 离心法 )1次
液相内毒素清除剂500 次 通用型 RT-LAMP 试剂盒50 次
固相内毒素清除剂100g 通用型 LAMP 试剂盒50 次
固相内毒素清除剂500g 通用 miRNA 克隆接头0.83nmol
柱式内毒素清除剂1.5mL 填入法 DNA 末端标记试剂盒 C5次
内毒素清除专用亲和介质5mL 填入法 DNA 末端标记试剂盒 B5次
白色念珠菌CMCC98001冻干粉 鲁氏接合酵母
贝酵母 类红红细菌
粟褐芽孢杆菌 灰色链霉菌
温特曲霉 醋酸菌
肠炎沙门氏菌亚利桑那亚种 停乳链球菌 ATCC 35666
地生翅孢壳 孔雀石绿链霉菌
头状丝孢酵母 苏云金芽胞杆菌托马诺夫亚种Bacillusthuringiensissubsp.toumanoffii
铜绿假单孢菌 大肠埃希氏菌
紫云英根瘤菌 青色链霉菌
嗜酸乳杆菌 洋葱伯克霍尔德氏菌
Top10 化学感受态细胞0.1mL×10费用光滑念珠菌冻干粉 白黄链霉菌
海滨芽孢杆菌 粗糙链孢霉
产酸克雷伯氏菌 普通变形杆菌
短裙竹荪东北变种 椭圆酿酒酵母
清酒酵母 改良马丁琼脂培养基90mm
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文献和实验TOP10 chemically competent cells
Overview This protocol is a variant of the Hanahan protocol [1] using CCMB80 buffer for DH10B, TOP10 and MachI strains. It builds on Example 2 of the Bloom05 patent as well. This protocol has been tested on TOP10, MachI and BL21(DE3) cells
xiaomage124 请问丁香园里的战友们，谁做过点突变？TOP10F'是不是甲基化菌株？恳请指教，多谢啦！:)有请好人帮我分析下TOP10F'菌株是否有甲基化功能，因为我要做点突变，如果这个菌株具有甲基化外源质粒DNA的功能就可以了，以下是此菌株对应的基因型，多谢啦！:) F'{lac Iq Tn10(TetR)} mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15 △lacⅩ74 recA1 araΔ139Δ(ara
本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术 大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论 (1)如何筛选合适的宿主菌株 ◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。 ◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。 ◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。 ◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（>7-8 kb），经转化
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