高效 E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次说明书

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服务流程：
1）高效 E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次说明书客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
储存事项:
A. 高效 E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次说明书在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. 高效 E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次说明书组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
DNA 上样液 ( 红 ),6×10mL  十二烷基磺酸100g
DNA 上样液 ( 蓝 ),6×10mL  生物素标记 dUTP 溶液50μL
DNA 上样液 ( 红 ),6×( 非甘油 )10mL  肾系膜细胞生长因子5mL
DNA 上样液 ( 蓝 ),6×( 非甘油 )10mL  神经元生长因子5mL
三合一 RNA 上样液 ( 含 EB) 1.5mL  少突胶质细胞生长因子5mL
96 孔板血液 DNAout( 真空法 )1次  一站式 RNA 电泳套装10 次
96 孔板血液 DNAout( 真空法 )5次  一站式 miRNA 尿素 -PAGE 电泳套装30 次
96 孔板血液 DNAout( 离心法 )1次  一站式 MBP 标签蛋白纯化套装20 次
凝固血液 DNAout30 次  一站式 His 标记蛋白质微量纯化套装20 次
凝固血液 DNAout100 次  一站式 His 标记蛋白质微量纯化套装20 次
一管式植物 DNAout500 次  一步法96 孔板单菌落质粒DNAout( 真空法)1次
中草药 DNAout20 次  一步法96 孔板单菌落质粒DNAout( 离心法)5次
中草药 DNAout100 次  一步法96 孔板单菌落质粒DNAout( 离心法)1次
柱式植物油 DNAout50 次  一步法 96 孔板质粒 DNAout( 真空法 )1次
木材 DNAout50 次  一步法 96 孔板质粒 DNAout( 离心法 )1次
白球拟酵母   许旺酵母变种
熏衣草灰链霉菌   生孢梭菌(产芽孢梭状芽孢杆菌)
拟囊体侧耳、(鲍鱼菇)   干酪棒杆菌(乳酪棒杆菌)
不动杆菌属   皱褶假丝酵母
胰蛋白胨大豆琼脂表面培养基60mm/25cm2   鲍氏志贺菌冻干粉
淡紫青霉   橄榄包毛壳
克柔念珠菌冻干粉   金黄色葡萄球菌冻干粉
梨形毛霉   砖红链霉菌
苏云金芽胞杆菌猝倒亚种 Bacillus thuringiensis subsp. sotto   香茅醇假单胞菌
红色红曲霉   白色链霉菌
高效 E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次说明书谷酸棒状杆菌（黄色短杆菌）   皱褶假丝酵母
栖土曲霉   玫瑰色链霉菌
金黄色葡萄球菌金黄色亚种   青春双歧杆菌
谷酸棒状杆菌   球型芽孢杆菌
斯氏李斯特氏菌   球孢链霉菌
实验步骤：
(1) 高效 E.coli 感受态细胞制备试剂盒20 次说明书实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)