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- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
26
- 英文名：
克必隆 G 载体
- 保质期：
详见说明书
- 供应商：
上海邦景
- 保存条件：
低温冷藏
- 规格：
2μg
服务流程：
1）克必隆 G 载体2μg规格客户提供材料
2）提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供：
新鲜材料或正确保存条件下材料（组织、细胞、细菌等）
4℃保存一周，-20℃保存一个月，-80℃保存一年血液样品（EDTA，肝素，柠檬酸钠抗凝）
详细的背景资料：来源、特点、类型等
我们提供：基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证：高纯度RNA/DNA、完整货期：3-5个工作日
储存事项:
A. 克必隆 G 载体2μg规格在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打，颠倒混匀，充分溶解RNase A和DNase I后，按照每次使用量分装－20℃冻存，有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项：
1. 克必隆 G 载体2μg规格组织和细胞取材速度要快，在获取后应当尽快浸入RNAwait，以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存，因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取：样本从-20℃或-80℃冰箱取出后，复苏到室温后，取出组织块，再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞，去除RNAwait，再用于提取RNA。后继的处理（如组织匀浆）可以在室温下进行，不必在液氮中操作，RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
6nt 随机引物 ( 抗水解 )，0.5mM100μL 动物种属鉴定 PCR Mix 1100 次
两管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次 动物线粒体总蛋白提取剂盒50 次
两管式 RT-PCR 试剂盒 (AMV-Taq)50 次 动物细胞裂解液 B50mL
单酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (Tth)50 次 动物细胞裂解液 A50mL
双酶一管式 RT-PCR 试剂盒 (MMLV-Taq)50 次 动物细胞核蛋白微量制备试剂盒25 次
大提柱式植物 RNAout5次 柱式细菌 RNAout50 次
柱式植物 RNA-DNA 双提试剂盒50 次 柱式细菌 RNA-DNA 双提试剂盒50 次
柱式藻类 RNAout50 次 柱式细菌 DNAout50 次
大提柱式藻类 RNAout5次 柱式细菌 DNAout( 含溶菌酶 )50 次
土壤 RNAout50 次 柱式无内毒素质粒 DNAout50 次
柱式细菌 RNAout50 次 柱式软体 RNAout50 次
柱式葡萄球菌 RNAout50 次 柱式软骨 RNAout50 次
柱式分枝杆菌 RNAout50 次 柱式葡萄球菌 RNAout50 次
柱式细菌 RNA-DNA 双提试剂盒50 次 柱式凝固血液 DNAout50 次
柱式 G+细菌 RNAout50 次 柱式尿液 DNAout50 次
Georgeniamuralis 大毛霉
沙保罗葡萄糖琼脂表面培养基60mm/25cm2 许旺酵母变种 糖化淀粉。
谢氏杆菌 酿酒酵母 酿造香槟酒
环状芽孢杆菌 酿酒酵母 酿造酱油
尿素八叠球菌 解淀粉芽孢杆菌
大肠埃希菌ATCC25922冻干粉 产气肠杆菌AS1.489冻干粉南京便诊
紫晶口磨 台湾根霉
甲型副伤寒沙门氏菌 褐球固氮菌
肺炎链球菌冻干粉 抗生链霉菌
假单胞菌 里氏木霉 细胞内β-葡萄糖苷酶;生产纤维素酶;生产脂肪等.
克必隆 G 载体2μg规格福氏志贺氏菌 露湿漆斑菌
戴尔根霉 蛹虫草（北冬虫夏草、北虫草）
木层孔菌 米曲霉 产淀粉酶
球孢毛霉 米曲霉 用于做清酒“木通口”的糖化菌
苏云金芽胞杆菌亚毒亚种Bacillusthuringiensissubsp.subtoxicus 赭曲霉 降解DNA
实验步骤：
(1) 克必隆 G 载体2μg规格实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验克隆载体 pRCII 转入大肠杆菌为例。TA 克隆载体 pRCII 含有 LacZ 基因，多克隆酶切位点位于其间，当没有外源基因插入 LacZ 基因中时，LacZ 基因的启动子可使此基因编码半乳糖苷酶，从而催化底物 X-gal 发生化学反应，菌落变成蓝色；当外源基因与 pRCII 载体发生连接时，LacZ 基因失活，菌落呈白色；同时该质粒还含有氨苄青霉素耐药基因。根据此特性，白色菌落含有重组质粒。在用这种质粒进行克隆时，转化平板培养基中要加入 0.5 mM IPTG、50 g/mL 氨
加热灭活酶。通过凝胶提取试剂盒纯化消化的pET-32α（+）载体骨架和从pMD18-T载体切下的基因片段。用T4 DNA连接酶在23℃下用pET-32α（+）载体骨架连接基因片段1小时，载体末端和插入末端的比例为1：3（fmol）。将10μl连接反应与100μl感受态大肠杆菌 BL21（DE3）在冰上混合10分钟，并将混合物在42℃下孵育90秒。加入800μlLB并在37°C下孵育40分钟。涂在含有100μg/ ml氨苄青霉素的LB平板上。在37°C孵育过夜。通过菌落PCR筛选插入物的存在或制备
Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的 DNA 样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相 DNA 的位置上显示出杂交信号。通过 Southern 杂交可以判断被检测的 DNA 样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA 指纹分析和 PCR 产物判断等研究中。但由于该技术的操作比较烦琐、费时，所以现在有一些其他的方法可以代替 Southern 杂交。但该技术也有它的独特之处，是目前其他方法
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