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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 亚型:
IgG
- 形态:
液态或冻干粉
- 保存条件:
低温
- 标记物:
FITC标记抗体
- 供应商:
圻明生物
- 浓度:
1mg/ml
- 抗体英文名:
Anti-Phospho-cdc25C (Ser216)/FITC
规格:100ul
浓度:1mg/ml
研究领域:免疫学 神经生物学 激酶和磷酸酶 表观遗传学
抗体来源:Rabbit
克隆类型:Polyclonal
交叉反应:Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep,
相关标记抗体:辣根过氧化物酶标记抗体,生物素标记抗体,胶体金标记抗体,红色罗丹明(RBITC)标记抗体,橙黄色PE标记抗体,绿色荧光素(FITC)标记抗体等。
圻明生物公司所售产品仅供科研试验。
FITC标记的磷酸化细胞分裂周期蛋白25C抗体用于标记的抗体,要求是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取IgG后再作标记。
作为标记的荧光素应符合以下要求:
①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团,与蛋白质结合后不易解离,而未结合的色素及其降解产物易于清除。
②荧光效率高,与蛋白质结合后,仍能保持较高的荧光效率。
③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。
④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。
⑤标记方法简单、安全无毒。
⑥与蛋白质的结合物稳定,易于保存。
生长因子和激素(Growth Factor and Hormones) 血管内皮细胞生长因子(VEGF)是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子,它能引起血管通透性增加,引起细胞外基质成分改变,诱导血管形成。在炎症、创伤愈合、心脏缺血、动脉粥样硬化、糖尿病性视网膜病变及肿瘤形成等与血管生成和病变有关的诸多病理过程中起重要作用,VEGF与血管生成有关,从而也与肿瘤生长也有很大关系,近年来受到很多关注。
FITC标记的磷酸化细胞分裂周期蛋白25C抗体免疫印迹操作-转膜
1).将凝胶玻璃板置于盛有电泳转移缓冲液的容器中,浸泡15 20min.。
2).带上手套,裁剪好滤纸(Whatman, 3MM CHR)和电转膜,滤纸和膜大小为83mmX 75mm,尽量避免污染滤纸和膜,将裁减好的滤纸和膜浸泡与电泳转移缓冲液中,驱除留于膜上的气泡。
3).打开转移盒并放置浅盘中,用转移缓冲液将海绵垫完全浸透后将其放在转移盒壁上,海绵上再放置- -张浸湿的 Whatman, 3MM滤纸。
4).小心将凝胶放置于滤纸上,避免气泡(用转移缓冲液润湿并戴手套以转移缓冲液润湿胶面,小心将电转膜放在胶面上,从凝胶的一边开始轻轻放下可避免气泡,注意- -定要戴手套或镊子接触膜)。
5).用去离子水清洗缓冲液槽,在缓冲液槽中放入搅拌子,将另一块海绵用转移缓冲液浸透后放在凝胶膜“三明治”上,关上转移盒并插入转移槽。
6).将冰盒装入缓冲液槽,注满4'C预冷的转移缓冲液。
7).将整个装置放在磁力搅拌器上并开始搅拌,连接好转移电极恒流300mA转移70min。
8).电转完毕后,将电转膜置于5%的脱脂奶粉(PBS 配制)中封闭,37*C2 小时或4C过夜。
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文献和实验指标:确认流式细胞仪能检测多少个通道,流式抗体每个通道只能选择1种荧光素。各个通道之间的荧光素可以随意搭配。如实验者同时检测三个指标,可以在下图中绿色、黄色和红色三个通道中各选一个适当的荧光素标记,FITC、PE和PE-cy5。切忌所有指标选择同一个通道的荧光标记,以防止荧光的重叠和相互干扰,影响最后结果。因此,流式细胞仪的通道越多,同一份样本能同时做的表面/胞内标志就越多。常用荧光标记包括FITC, PE, PEcy5, PEcy5.5, APC等。 4、同型对照的选择: 流式细胞
FITC, FL2通道检测PE,则需将仪器的补偿设置为FL1-%FL2=1.10,FL2-%FL1=16.52.可以简单理解为:PE荧光染料的1.10%漏到FL1检测通道,需从FL1中减除,而FITC荧光染料的16.52%漏到FL2检测通道,需从FL2中减除。 常见荧光染料亮度比较 荧光染料的亮度可以用来比较不同荧光染料的荧光标记效果,通过阴性细胞群与阳性细胞群的荧光信号之间的关系来表示。但是阴性细胞群的荧光信号受到信号强度、自发荧光、非特异性染色、仪器的电子噪声等多个因素
一致; ②单阳管和全染管的样本处理要相同,如:全染管进行了固定破膜处理,单阳管即使是表面因子,也需要进行固定破膜; ③单阳管上机的电压要和全染管保持一致; ④单阳管要保证有足够的阳性细胞群。 C. 单阳对照常见问题 问:目标 marker 表达量高,阴阳细胞分群明显,也需要设置单阳管吗? 答:如果 panel 的指标少,可以不用设单阳管,通过手动调节补偿,将细胞调整到横平竖直的状态即可。但是,如果 panel 的指标比较多,就必须都设置单阳管。 补偿前 ↓ 补偿后 ↓ 图示:FITC 和 PE 之间
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