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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 亚型:
IgG
- 形态:
液态或冻干粉
- 保存条件:
低温
- 标记物:
FITC标记抗体
- 供应商:
圻明生物
- 浓度:
1mg/ml
- 抗体英文名:
Anti-phospho-NDEL1(Ser231)/FITC
规格:100ul
浓度:1mg/ml
研究领域:免疫学 神经生物学 激酶和磷酸酶 表观遗传学
抗体来源:Rabbit
克隆类型:Polyclonal
交叉反应:Human, Mouse, Rat, Chicken, Dog, Pig, Cow, Horse, Sheep,
相关标记抗体:辣根过氧化物酶标记抗体,生物素标记抗体,胶体金标记抗体,红色罗丹明(RBITC)标记抗体,橙黄色PE标记抗体,绿色荧光素(FITC)标记抗体等。
圻明生物公司所售产品仅供科研试验。
FITC标记的磷酸化中心粒蛋白Nudel抗体用于标记的抗体,要求是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取IgG后再作标记。
作为标记的荧光素应符合以下要求:
①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团,与蛋白质结合后不易解离,而未结合的色素及其降解产物易于清除。
②荧光效率高,与蛋白质结合后,仍能保持较高的荧光效率。
③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。
④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。
⑤标记方法简单、安全无毒。
⑥与蛋白质的结合物稳定,易于保存。
生长因子和激素(Growth Factor and Hormones) 血管内皮细胞生长因子(VEGF)是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子,它能引起血管通透性增加,引起细胞外基质成分改变,诱导血管形成。在炎症、创伤愈合、心脏缺血、动脉粥样硬化、糖尿病性视网膜病变及肿瘤形成等与血管生成和病变有关的诸多病理过程中起重要作用,VEGF与血管生成有关,从而也与肿瘤生长也有很大关系,近年来受到很多关注。
FITC标记的磷酸化中心粒蛋白Nudel抗体免疫印迹操作-转膜
1).将凝胶玻璃板置于盛有电泳转移缓冲液的容器中,浸泡15 20min.。
2).带上手套,裁剪好滤纸(Whatman, 3MM CHR)和电转膜,滤纸和膜大小为83mmX 75mm,尽量避免污染滤纸和膜,将裁减好的滤纸和膜浸泡与电泳转移缓冲液中,驱除留于膜上的气泡。
3).打开转移盒并放置浅盘中,用转移缓冲液将海绵垫完全浸透后将其放在转移盒壁上,海绵上再放置- -张浸湿的 Whatman, 3MM滤纸。
4).小心将凝胶放置于滤纸上,避免气泡(用转移缓冲液润湿并戴手套以转移缓冲液润湿胶面,小心将电转膜放在胶面上,从凝胶的一边开始轻轻放下可避免气泡,注意- -定要戴手套或镊子接触膜)。
5).用去离子水清洗缓冲液槽,在缓冲液槽中放入搅拌子,将另一块海绵用转移缓冲液浸透后放在凝胶膜“三明治”上,关上转移盒并插入转移槽。
6).将冰盒装入缓冲液槽,注满4'C预冷的转移缓冲液。
7).将整个装置放在磁力搅拌器上并开始搅拌,连接好转移电极恒流300mA转移70min。
8).电转完毕后,将电转膜置于5%的脱脂奶粉(PBS 配制)中封闭,37*C2 小时或4C过夜。
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文献和实验抗体二抗上连接有荧光染料。直接标记染色背景低,实验程序少尽量减少实验工序和过程,以保证实验的真实和准确性。因此在条件允许的范围内,建议尽量用直接标记的抗体进行实验。 3、流式抗体荧光标记的选择: 如果实验中检测单一指标:不同荧光标记在不同的仪器上强度不同。以某仪器为例:PE >APC >PE-Cy5 >PerCP >FITC >PerCP-Cy5.5,通常来说,PE最强,适用于弱表达抗原。FITC强度较弱,适用于强表达抗原,使用范围比较广。用户需根据检测的目标蛋白进行具体选择。 如果同时检测多个
当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一般最多能结合15~20个,一个IgG分子可结合2~8个分子的FITC,其反应式如下FITC-N=C=S + N-H2-蛋白质 → FITC-NS-C-N-H2-蛋白质常用Marsshall(1958)法标记荧光抗体,也可以根据条件采用Chadwick等标记法或Clark
双重染色法免疫荧光组织化学染色步骤若在同一标本中有A和B两种抗原需要同时显示,A抗原的抗体用FITC标记,B抗原的抗体用TRITC标记,可采用以下染色方法:免疫荧光细胞化学双重染鱼法原代培养胚胎14天大鼠端脑细胞:在骨发生形态蛋白―{诱导下,乙酰胆碱转移酶(呈绿色荧光)和同源域蛋白Islet―1(呈红色荧光)共存于细胞质内(激光扫描共聚焦显微镜观察)1.一步双染色法先将两种荧光标{己抗体按适当比例混合(A+B),按直接法进行染色。2.二步双染色法先用TRITC标记的A抗体进行免疫荧光染色,再用
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