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- 百奥莱博
- BTN130629-WYV
- 北京
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
158
- 英文名：
RecJf Exonulease
- 保质期：
半年
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-20℃
- 规格：
1000U
特别提示：包括RecJf核酸外切酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：RecJf核酸外切酶
英文名称：RecJf Exonulease
产品货号：BTN130629
产品规格：1000U
RecJf作用于单链DNA，沿5´→3´方向催化去除单磷酸脱氧核苷酸。RecJf与麦芽糖结合蛋白(MBP)融合表达。其催化特性与野生型RecJ相同。与MBP的融合，增强了RecJf的溶解度。当底物为5´端突出了22个核苷酸的DNA时，经RecJf酶切后可得到含有以下三种末端的混合产物：平齐末端、5´突出末端(1-5个核苷酸)和5´凹陷末端(1-8个核苷酸)。RecJf发挥活性时无需5´末端磷酸化。
产品特点：
1．特异性5´→3´单链DNA核酸外切酶；
2．从DNA上切下单磷酸脱氧核苷酸。
储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期半年。
活性定义：1单位指在50μl反应体系中，37℃条件下，30分钟内产生0.05nmol可溶于TCA的脱氧核糖核苷酸所需要的酶量。
除了RecJf核酸外切酶,，我公司还供应以下相关产品：
名称：末端脱氧核糖核酸转移酶(TdT酶)
货号：YT512
规格：500U
本酶是一种模板依赖的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、单链或双链DNA的3"羟基端加上dNTP。可以催化的寡核苷酸的zuì短长度为3个核苷酸。
用途：寡核苷酸或DNA 3"羟基末端标记；DNA末端加尾(DNA tailing)；5"-RACE；合成同一种脱氧核苷酸的寡聚链等。
来源：由大肠杆菌表达，表达基因的来源为小牛胸腺。
活性定义：37℃60分钟内，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3"羟基末端中所需的酶量定义为1个活性单位。
酶活性检测条件：200mM potassium cacodylate(pH7.2),1mM CoCl2,0.1mM DTT,0.01%(v/v)Triton X-100,10μM oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
纯度：不含DNA内切酶和外切酶，不含RNase。
酶储存溶液：100mM KAc(pH6.8),2mM 2-mercaptoethanol,0.01%(v/v)Triton X-100 and 50%(v/v)glycerol 。
Reaction Buffer(5X)：0.125M Tris(pH7.2 at 25℃),1M potassium cacodylate,0.05%(v/v)Triton X-100,5mM CoCl2。
失活或抑制：70℃加热10分钟或加入适量EDTA均可导致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘离子和磷酸根均对Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
储存条件：-20℃。
使用说明：
1. DNA 3’末端标记：
a. 参考如下表格设置反应体系：
待标记DNA————————————————————10 pmol of 3"-termini
Reaction Buffer (5X) ——————————————10µl
[α-32P]-ddATP, ~10TBq/mmol (3000Ci/mmol)————1.85 MBq (50µCi)
TdT (20U/µl) ——————————————————2µl
补充无核酸酶的去离子水 —————————————至50µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。
说明：标记的效率和3’羟基末端的类型有关，3’突出末端的标记效率要显著高于3’缩进末端或平末端的标记效率。
2. DNA末端加尾(DNA Tailing)：
a. 参考下表格设置反应体系：
DNA片段 ————————————————————1 pmol of 3"-termini
Reaction Buffer (5X)——————————————4µl
dATP or dTTP——————————————————130pmol
或 dGTP or dCTP (四种中通常只需加入一种)————60pmol
TdT (20U/µl)——————————————————1.5µl
补充无核酸酶的去离子水—————————————至20µl
b. 按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用 Vortex在zuì低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
c. 37℃孵育15分钟。
d. 70℃孵育15分钟或加入5µl 0.5M EDTA终止反应。
说明：在上述反应条件下，每个3’羟基末端可以加上100-130个dA或dT，或20-30个dC或dG。
3. 其他用途可以参考上述用途或适当的文献资料进行。
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文献和实验在核酸水解酶中，是具有从分子链的末端顺次水解磷酸二酯键而生成单核苷酸作用的酶，与核酸内切酶相对应。可大致分为水解磷酸二酯键的 3′端生成 5′ -单核苷酸的酶，及水解 5′端生成 3′ -单核苷酸的酶。前者有蛇毒磷酸二酯酶及大肠杆菌核酸外切酶Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ等；后者有脾脏磷酸二酯酶、嗜酸乳杆菌（ Lac-tobacillus acidophilus）核酸酶。这些酶中还可以区别出从分子链的 3′末端或 5′末端开始切断和对单链 DNA或双链 DNA具有特异作用的酶。可利用这些酶水解
脾脏核酸外切酶spleen exonuclease，spleenphosphodiesterase
亦称脾脏磷酸二酯酶（spleen phosphodieste- rase）。系将具有 5′ -OH末端的 DNA和 RNA，从 5′末端向 3′方向不断使 3′ -核苷酸游离分解的酶。 EC3． 1． 16． 1。常从牛脾脏提纯的此种酶。高分子 DNA不易水解，但用 DNaseⅡ或普氏微球菌（ Micrococ-cus pyogenes）核酸酶处理，则可以完全水解。对碱基序列无特异性，但在 5′末端有磷酸单酯基则不水解。反应不需要 Mg2 ，但最适 pH在有 2× 10
率。 核酸酶污染的过夜鉴定 所有的限制性内切酶 与1μg 底物DNA在50μl反应体系中，采用推荐的NEBuffer温育过夜。比较酶切1小时的特征带型和过夜酶切的带型。如果两种情况下带型均明显、没有改变，则说明测试的酶中不存在非特异性的DNA酶。我们报道了可以温育过夜的最大酶单位数。 核酸外切酶污染鉴定 所有的限制性内切酶与1μg 单双链混合的、3H标记的E.coli DNA (200,000 cpm/μg)在50μl反应体系中
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