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- 2025年11月06日
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950
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上海烜雅生物科技有限公司
易错PCR（error-pronePCR）是利用TaqDNA多聚酶不具有3′→5′校对功能的特性，在一定条件下（如不同的dNTP浓度、Mg浓度和MnCl2存在）能够按较高的机率引入随机引入突变。如果有适当的选择方法，则可从构建的突变库选出所需突变体。易错PCR和常规PCR的比较如下：
核苷酸类似物法易错PCR试剂盒本产品就是专门为广大的研究工作者进行易错PCR而开发，本产品具有下列特点：
1.即开即用，十分简单方便，尤其在生物制药和酶学研究领域显示出了它的优越性。
2.配方经过精心优化，突变率稳定，突变没有趋向性。易错PCR的突变率为0.66%（±0.13%），详见使用手册疑难解答。
3.比体内基因突变更快捷简单，但如果在PCR引物中设计位点，则可使产物克隆到表达载体，也可以用于体内蛋白活性的筛选。
4.可用于连续易错PCR（sequentialerror-pronePCR），只需把上一次易错PCR的产物用作下一次易错PCR的模板即可，使每一次获得的小突变累积而产生重要的有益突变。
5.只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。
核苷酸类似物法易错PCR试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存,有效期为一年。
自备试剂：引物、DNA模板、超纯水。
核苷酸类似物法易错PCR试剂盒使用方法
1.以30uL的标准PCR反应体系为例，如果反应体系不是30uL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的PCR管中，加入下列成分：
核苷酸类似物法易错PCR试剂盒注意：本试剂盒只适用于扩增1kb以下的产物，对于1kb以上的产物，建议分段扩增。
2.按用户已经优化的PCR条件进行一定循环数的PCR（循环数与突变率的关系见下表），然后取10uL电泳检查。如果没有优化的PCR条件，一般可以先尝试下面的PCR条件(注意：易错PCR一般不需要热启动，也不需要在PCR结束后做延伸处理)：
3.电泳检测是否得到预计长度的PCR产物。
4.后续操作(如克隆后测序)，易错PCR产物不能直接测序。
核苷酸类似物法易错PCR试剂盒疑难解答
Q：易错PCR与定点突变PCR有什么区别？
A：定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。它需要预先知道靶基因的序列。易错PCR是一种随机突变，它不需要预先知道靶基因的序列（引物结合部分除外），但需要后续的筛选方法筛选自己所需要的突变。
核苷酸类似物法易错PCR试剂盒Q：易错PCR的错误率是多少？
A：易错PCR的突变率为0.66%（±0.13%），对500bp的PCR产物，相当于有4%的PCR片段为野生型，12%的含一个突变，20%的含两个突变，22%的含三个突变，18%的含四个突变，12%的含五个突变，12%的含六个或更多突变。
Q:如果需要每个核苷酸有高于0.66%的突变率，如何办？
A:可以使用连续多次易错PCR来提高突变率。但最好先用胶纯化回收PCR片段,再用于下一轮PCR。此外不能用少于千分之一的第一次PCR产物作为第二轮易错PCR的模板，否则多样性将受到影响。第三轮易错PCR最好使用所有第二轮的PCR产物作为模板，但需要在10mL体系中完成（可以分成很多100uL体系进行）。
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