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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0611
- 2025年11月06日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
Rapid DNA-RNA Blotting Kit
- 库存：
890
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是基于毛细管转膜法的Southern和Northern印迹膜制备试剂，专门用于从电泳得到的凝胶中制备用于Southern杂交和Northern杂交的印迹膜。本产品具有下列特点：
1.即开即用，提供制备5次Southern或Northern转膜（13×20cm）所需要的转膜液。
2.快速：转膜过程只需要1小时，整个过程（加上变性和中和等步骤）只需要2.5小时(对DNA)或1.5小时（对RNA）。
3.跟硝酸纤维素膜、带电尼龙膜、中性尼龙膜和PVDF膜兼容。包括Nytron、GeneScreenPlus、Zetabind、Biotrans、Hybond-N、Immobilon等。
4.硝酸纤维素膜适用于最小长度在400bp以上的靶分子，带电尼龙膜适用于最小长度在40bp以上的靶分子。
5.使用优化的下向转膜法，不但效率比上行转膜法高30%左右，而且条带弥散度低、分辨率高。
6.可用琼脂糖胶（包括脉冲电泳胶，DNA电泳、RNA甲醛胶电泳和RNA电泳）和DNAPAGE胶。
超快核酸转膜试剂盒运输及保存：
常温运输及保存，有效期1年。
自备试剂：琼脂糖电泳试剂、去离子水、印迹膜（硝酸纤维素膜或尼龙膜）
超快核酸转膜试剂盒使用方法
一：Southern印迹膜的制备（DNA转膜，中性尼龙膜，硝酸纤维素膜）
1.按常规方法进行电泳（包括脉冲电泳），本试剂盒不提供电泳所需试剂。如果进行常规的Southern杂交，建议使用0.7%琼脂糖进行电泳，分离酶切的基因组DNA。电泳时最好加电泳分子量对照、酶切对照（先将标记的全长lambdaDNA或探针质粒与样品DNA的混合，再酶切）、阴性样品（不含检测片段的DNA样品）、杂交分子量对照（标记的lambda/HindIII）等。电泳后和荧光标尺并排拍照。
2.变性：首次使用时需配制变性液2.5L（在3L的干净玻璃烧杯中加入约2L自备的去离子水，搅拌缓慢中加入220g成分A和100mL溶液B，溶解后定容到2.5L后即可用），将凝胶转移到一个至少含10倍于胶体积的变性液中，脱色摇床上室温下摇晃处理60分（如果使用带正电尼龙膜，此步处理可以缩短到30分钟）。未用完的变性液可放瓶中室温保存。
3.配制转膜液：如果使用带正电的尼龙膜，则直接用上步配制的变性液转膜，如果使用中性尼龙膜和硝酸纤维素膜，则需配置转膜液（在3L的干净玻璃烧杯中加入约2L自备的去离子水，缓慢搅拌中加入440g成分A和2mL溶液B，溶解后定容到2.5L后即可用）。将凝胶转移到至少10倍于凝胶体积的转膜液中，脱色摇床上室温下摇晃处理15分。
4.设置转膜体系：测量凝胶的大小，然后借助尺子准确切出一张印迹膜，每边比凝胶大1mm，并切去一角，将印迹膜漂浮于去离子水上20分钟确保全部湿润，再按下图设置下行转膜体系（比上行转膜体系效率高30%）。图中membrane即印迹膜，transferbuffer即转膜液，吸水滤纸厚度为2-3cm，一般按每cm2印迹膜需要1mL转膜液的比例准备转膜液。对大的凝胶，可以同时使用两张滤纸分别跟两个容器的转膜液连接以便使转膜匀浆。
5.洗胶：凝胶转移到一个含至少10倍于胶体积的转膜液中，脱色摇床上室温下摇晃处理15分。
6.转膜：常温转膜1小时。结束后用铅笔标记印迹膜的核酸结合面以免搞错。注意：不要过夜转膜，否则信号将降低50%。
7.中和：将印迹膜在中和液中处理10分钟，中和液的用量至少为0.5mL/cm2印迹膜。中和液容易长细菌，不建议长期放置。
8.检测效果：可将凝胶放入EB（0.5ug/mL）溶液中染色30分钟后UV下观察残留核酸的量，反推转膜效率。此步也可跳过。也可以另购印迹膜染液处理印迹膜，日光下观察转膜效果。
9.固定：将印迹膜夹在两层滤纸中间80℃干燥15分钟以固定核酸（不需真空），干燥时间不需延长，否则杂交信号可能会降低。
10.此时印迹膜可直接用于后续的核酸杂交实验或者在干燥状态下保存待用（可放数月）。
超快核酸转膜试剂盒二：Southern印迹膜的制备（带正电尼龙膜，DNA转膜）
11.电泳步骤同第1步。
12.变性：同第2步，只是时间缩短到30分钟。
13.配制转膜液：不需配制，直接用变性液转膜。
14.其余处理同第4步到第10步。
三：Northern印迹膜的制备（RNA转膜）
15.按常规方法进行电泳，本试剂盒不提供电泳所需试剂。本方法适用于甲醛变性胶和乙二醛变性胶，电泳后和荧光标尺并排拍照。
16.凝胶不需要变性和洗胶处理（也不能变性，否则RNA将会降解），电泳后直接进入转膜步骤，完全按第6到第10步处理。
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： 1、实验准备 提取蛋白所需的研磨器材，以及制胶的玻璃板、梳子要清洗干净; 若长期不使用，建议器材在实验前再行清洗一次以杜绝相应的污染。 2、提取蛋白 选择合适的蛋白裂解液，充分去除一些干扰因素，比如核酸，多糖，脂类等; 建议蛋白在测量浓度后变性分装保存，避免反复冻融使蛋白发生降解; 注意 Loading buffer 在保质期内，蛋白加入 Loading buffer 后充分混匀，再煮沸变性。 3、制胶 玻璃板夹紧之后，有些人习惯性加水试一下是否漏胶，建议
聚丙烯酰胺凝胶电泳时迁移较慢，而没有结合蛋白的探针则较快；孵育的样本在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳并转膜后，蛋白-探针复合物会在膜靠前的位置形成一条带，说明有蛋白与目标探针发送互作。二、实验操作步骤1、实验前准备（1）合理的实验方案根据研究目的合理设计特异性探针实验组以及非特异性探针对照组，如有必要还可以添加特异性抗体组、特异性核酸竞争组等（2）样本制备可以选择提取样本的总蛋白、核蛋白或者使用纯化好的目的蛋白。对样本蛋白进行定量，实验中等量加入蛋白。（3）探针制备根据实验要求设计不同的探针并添加
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