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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
-20℃ to -80℃
- 保质期:
12个月
- 英文名:
Human CA5A / CA-VA Protein (His Tag)
- 库存:
99
- 供应商:
北京义翘神州科技股份有限公司
- 规格:
50 µg
蛋白名称:Human CA5A / CA-VA Protein (His Tag)
蛋白构建:A DNA sequence encoding the mature form of human CA5A (NP_001730.1) (Ala 40-Ser 305) was fused with an Met at N-terminus and a polyhistide tag at the C-terminus.
表达宿主:E. coli
蛋白纯度:> 96 % as determined by SDS-PAGE
蛋白活性:Measured by its esterase activity. The specific activity is >500 pmoles/min/μg.
蛋白内毒素:Please contact us for more information.
预测N端:Met
蛋白分子量:The recombinant human CA5A consisting of 277 amino acids and has a calculated molecular mass of 31.6 kDa. It migrates as an approximately 33 kDa band in SDS-PAGE under reducing conditions.
蛋白NP号:NP_001730.1
蛋白氨基酸序列:Ala40-Ser305
蛋白标签:C-His
蛋白保存条件:Store it under sterile conditions at -20℃ to -80℃. It is recommended that the protein be aliquoted for optimal storage. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
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文献和实验[2] ✦ CUT&RUN 原理: 图 4:CUT&RUN 原理 [3] 利用连有刀豆蛋白 A 的磁珠(concanavalin A-coated magnetic beads)结合细胞。使用非离子去污剂洋地黄皂苷进行细胞膜通透。然后孵育靶蛋白(如转录因子, TF )的抗体和 Protein A-MNase 。抗体和 Protein A-MNase 能够通过核孔进入细胞核,MNase 通过 Protein A 和抗体的介导切割靶蛋白附近的 DNA 序列。 MNase 的活化需要 Ca
外环境中(图3)。Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,能与PS高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素(FITC、PE)或biotin标记,以标记了的Annexin-V作为荧光探针,利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。 碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但在凋亡中晚期的细胞和死细胞,PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。因此将Annexin-V与PI匹配使用,就可以将凋亡早晚期的细胞
。加入过量的螯合剂(EGTA)螯合Ca2+,使纯化的复合物与层析柱分离。 TAP 纯化时存在蛋白污染问题,很难判断这些蛋白是真正的相互作用,还是蛋白处理过程中的副产品。为此,有人建议用三标签的方法[19],但实验表明该法也不能排除蛋白的污染。其他标签也有应用,比较流行的是Flag[20]。GST、His6、生物素等也分别用于蛋白纯化,但由于他们有限的亲和力及较高的背景,在大规模的蛋白质相互作用研究中未得到广泛应用。选择何种标签也许是个难题,每种标签都有自身的弱点:大标签适于规模较大的相互作用研究
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