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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温运输和保存
- 保质期:
两年
- 英文名:
TdT-Tailing DNA Probe Labeling Kit
- 库存:
890
- 供应商:
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3’端添加dNTP尾巴的原理而设计,该反应的示意图如下:

TdT加尾法DNA Digoxin标记试剂盒本产品是在上述原理的基础上开发的,具有下列特点:
1.快速,15分钟即可完成标记反应。
2.不但可用于单链DNA和DNAOligo标记,还可用于3’突出的双链DNA标记,但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物(生物素和Digoxin标记的核苷酸等)。
4.提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带Digoxin标记核苷酸三种选择。
5.同时提供非标记的dATP,用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6.标记的探针可用于电泳迁移率实验(EMSA)、原位杂交(ISH)、Northern Blot(不推荐用于低丰度RNA检测)、小RNA Northern、SouthernBlot(不推荐用于单拷贝基因检测)、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
TdT加尾法DNA Digoxin标记试剂盒运输及保存:
低温运输,-20℃保存,有效期一年
自备试剂:DNA模板
TdT加尾法DNA Digoxin标记试剂盒使用方法
1.在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20uL体系的标记反应(如果需要标记更多探针,请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度):

2.37℃反应15分钟,延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在,一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸(标记物空间阻碍抑制延长);如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP(其他dNTP也可,只是本试剂盒只提供dATP而已),每条探针上可加上约100个核苷酸,平均含5个标记核苷酸
3.70℃10分钟灭活TdT酶。
4.如果需要,可以PAGE电泳+银染(相关试剂需要另购)检测标记效率,带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5.如果是非同位素标记,探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针,请不要酚/氯仿抽提,因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6.使用时需将探针以1-8ng/uL的终浓度加入到杂交液中(如果探针是双链DNA,加入前还需热变性)。如果不立即使用,非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年,同位素标记的探针DNA不能放置。
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文献和实验。 a.时间越长,DNA的产量越多,污染也越多 7. 12000转速离心5-10min,去上清,倒置于吸水纸上数分钟,加入700µl 70%的酒精,上下颠倒数次,洗涤沉淀。12000转离心5-10m,去上清,倒置于吸水纸上数分钟。重复一遍。 8. 12000转速离心5-10min,去上清,倒置于吸水纸上数分钟,最后置于超净工作台中吹干。 9. 在离心管中加入30-50µl的灭菌去离子水或者TE溶液,4℃放置数小时,使其充分溶解。 10
从组织中获取DNA难吗?不难,真不难。高一就有开设的从鸡血中获取DNA的生物实验课,很简单的几步就可以得到DNA。但要想获取高质量的DNA,尤其是从一些富含多糖、多酚、淀粉、纤维和蛋白的组织,后面用于酶切、高通量测序大片段文库的构建,还是有一定的难度的。最近协助北京农业生物技术研究中心一个老师提取桃叶片DNA还是遇到了一些困难,因为老师要做桃的个体重测序,因此对DNA的要求还是非常高的。之前跟其他很多老师交流植物DNA的提取,大多数目前仍然使用CTAB法,有些老师购买试剂盒进行提取,其实
1)膜的处理:戴上干净手套,取出硝酸纤维膜,按需要剪成一定大小,量好各样点间距离,用软铅笔标记。 2)DNA变性:将DNA溶液于1×TE(pH8.0)缓冲液中或蒸馏水中,取一定量DNA样品加于小塑料管中,在100℃沸水中煮10min,迅速入冰水中。 3)点样:用塑料或硅化玻璃或微量加样器取1~5μl变性DNA,将滴管放在硝酸纤维膜上,使DNA慢慢吸在滤膜上,点样完后凉干。 4)固定:将凉干的滤膜夹在滤纸中,于80℃干烤2~3h,然后进行杂交。
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