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- YLK-PCR0160
- 国产
- 2026年04月07日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
65
- 英文名：
DNA Extraction Kit（Adsorption column method）
- 保质期：
18个月
- 供应商：
优利科（上海）生命科学有限公司
- 保存条件：
2~8℃
- 规格：
50T
通用名 ：DNA提取试剂盒（吸附柱法）
Name ：DNA Extraction Kit（Adsorption column method）
【产品介绍】
本试剂盒可以从多种样本中提取基因组DNA，包括动物内脏、肌肉组织、血液以及培养的细胞和细菌等。本法基于对基因组DNA具有高度选择性的高分子膜材料，只需几个步骤即可完成提取过程，在30分钟内完成高纯度DNA的提取。
本试剂盒提取的DNA可以用于Real-time PCR、测序等分子生物学实验。
【产品原理】
动物内脏、肌肉组织、血液以及培养的细胞和细菌等样本在裂解液和蛋白酶K的作用下破碎并可使大部分蛋白质变性，释放出基因组DNA。在其所提供的合适的盐离子和pH环境的作用下，与乙醇混合后，基因组DNA特异性地结合于膜上，大部分蛋白质及其他杂质在两次洗涤过程中被洗下，而DNA与膜结合牢固，在洗脱液的作用下被洗下。
【试剂组成】
| 名 称 | 规格 |
| 蛋白酶K | 0.5mL |
| 裂解液 | 10.0mL |
| 去蛋白漂洗液 | 11.825mL（第一次使用前加入15.675mL无水乙醇） |
| 洗涤液 | 11.55mL（第一次使用前加入26.95mL无水乙醇） |
| 洗脱液 | 10.0mL |
| 吸附柱 | 50只 |
| 使用说明书 | 1份 |
【试剂规格】50 T/盒。
【储存运输】蛋白酶K保存于2~8℃。其余成分可室温储存。保存得当可稳定使用18个月。
【自备材料】
灭菌的1.5mL离心管、各种规格灭菌的枪头、离心机（最大转速不小于14,000rpm）、无水乙醇、漩涡震荡器等。
【操作步骤】
蛋白酶K放于2~8℃冰箱保存，使用时取出。
- 样本处理
a）如果全血体积大于200μL，请先使用红细胞裂解液或淋巴细胞分离液收集细胞，然后用200μL PBS缓冲液或生理盐水充分重悬，进行步骤2。
b）如果样本不足200μL，可以加入适量的PBS缓冲液或者生理盐水补足200μL，进行步骤2。
c）从人血液中提取DNA的方法与从哺乳动物血液中提取DNA的方法相同。
d）从鸟类血液中提取的DNA需将不多于20μL血液样本，加PBS缓冲液至200μL，混合后开始提取，进行步骤2。
（2）组织样本：
每份组织分别从不同的三个位置称取1g，用手术剪剪碎混匀后取约50mg置于研磨器中，加入0.5mL-1mL生理盐水研磨，匀浆后转入1.5mL灭菌的离心管，8000rpm离心2分钟，取上清200μL加入1.5mL离心管，进行步骤2。
（3）培养的细胞：
悬浮细胞：细胞培养液3000rpm离心2分钟，去上清，收集2×106个细胞（容积200μL），转移至1.5mL离心管，进行步骤2。
贴壁细胞：去上清，收集2×106个细胞（容积200μL），转移至1.5mL离心管，进行步骤2。
（4）其他液体样本：
1000rpm离心2分钟 ，弃上清，收集沉淀，进行步骤2。
（5）菌液：
培养的菌液，5000rpm离心1分钟，弃上清，收集至少2×106个细菌，进行步骤2。
- 将200μL上述样本和10μL 蛋白酶K加入一只新的1.5mL离心管，然后加入200μL 裂解液，震荡混匀5-10秒。
- 56℃温育10分钟。
- 在上述离心管中加入200μL无水乙醇，充分震荡混匀5-10秒(此步骤不可离心)。
- 将步骤4混匀的液体吸取至一只套有收集管的吸附柱上（注意不要吸到悬浮的杂质，以免阻塞吸附膜），6000-8000rpm离心1分钟，弃去管内液体。
- 将500μL去蛋白漂洗液加入吸附柱中，10000rpm离心30-60秒，弃去管内液体。
- 将700μL 洗涤液加入吸附柱中，10000rpm离心30-60秒，弃去管内液体。
- 将吸附柱放回接液管上，13000rpm离心2分钟。
- 将吸附柱转移到一只干净的1.5mL离心管（不提供）中。
- 向吸附柱内加50-100μL 洗脱液，室温静置1分钟，13000rpm离心1分钟，弃吸附柱，离心管中液体含有基因组DNA。提纯的DNA如果不立刻使用，请保存于-20℃。
【注意事项】
1. 本试剂盒适用于不多于200μL的全血基因组提取，大于200μL的血液建议用红细胞裂解液或淋巴细胞分离液处理后将白细胞富集，然后进行后续操作。
2. 适用于从动物内脏、肌肉组织、血液，以及培养的细胞和细菌等样本提取DNA。
3. 新鲜血液存放于2-8℃中或者-20℃保存。
4. 提取的DNA含量少或者基本没有的原因：
1）样本中细胞过少；2）蛋白酶K没有保存在2-8℃，活性降低。
5．提取鸟类血液时，将样本、蛋白酶K和裂解液混合后液体非常粘稠，需减少样本使用量，20μL鸟类血液加入PBS缓冲液稀释至200μL。
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文献和实验Genomic DNA Mini Kit 人或动物组织及培养细胞的基因组DNA提取试剂盒 29、QuickSpin BactoGenomic DNA Mini Kit（细菌基因组DNA提取试剂盒） 30、QuickSpin YeastoGenomic DNA Mini Kit（酵母基因组DNA提取试剂盒） 31、QuickSpin Plant Genomic DNA Mini Kit（植物及丝状真菌基因组DNA提取试剂盒） 31、QuickSpin Plasmid Miniprep Kit（质粒
其基本原理是：以PCR(聚合酶链式反应)为基础，结合了RFLP、RAPD的分子标记技术。把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”，用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那些与3-端严格配对的片段才能得到扩增)，再在有高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物，用放射性法、荧光法或银染染色法均可检测之。 一、 实验
方法。故本采用试剂盒和相关文献的方法作为参考，对垫料总DNA的提取进行摸索。 样品采集自中国人民解放军73121部队福建福州新店养猪场，垫料使用时间3-5个月。分别采用土壤总DNA提取试剂盒法、粪便总DNA提取试剂盒法、淤泥总DNA提取试剂盒法、SDS法、CTAB 法和SDS-CTAB结合法提取养猪发酵床垫料微生物总DNA，对6种方法提取的DNA的浓度和纯度进行比较评价。 采用土壤总DNA提取试剂盒法提取四种垫料的DNA，所得到的DNA浓度最低，质量也很低，并且纯度也很低
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