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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0594
- 2026年03月17日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
TdT-Tailing DNA Probe Labeling Kit
- 库存：
890
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3’端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：
TdT加尾法DNA标记试剂盒本产品是在上述原理的基础上开发的，具有下列特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2.不但可用于单链DNA和DNAOligo标记，还可用于3’突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物（生物素和Digoxin标记的核苷酸等）。
4.提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带Digoxin标记核苷酸三种选择。
5.同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6.标记的探针可用于电泳迁移率实验（EMSA）、原位杂交（ISH）、Northern Blot（不推荐用于低丰度RNA检测）、小RNA Northern、SouthernBlot（不推荐用于单拷贝基因检测）、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
TdT加尾法DNA标记试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年
自备试剂：DNA模板
TdT加尾法DNA标记试剂盒使用方法
1.在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20uL体系的标记反应（如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度）：
2.37℃反应15分钟，延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸（标记物空间阻碍抑制延长）；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP（其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已），每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸
3.70℃10分钟灭活TdT酶。
4.如果需要，可以PAGE电泳+银染（相关试剂需要另购）检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5.如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/氯仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6.使用时需将探针以1-8ng/uL的终浓度加入到杂交液中（如果探针是双链DNA，加入前还需热变性）。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。
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文献和实验TdT加尾效果；2）简单的5×加尾缓冲液；3）高度纯化的重组TdT，适合于5＇RACE用。另外，重新设计的扩增引物符合带有古细菌DNA聚合酶（含有3＇到5＇外切核酸酶活性）的长PCR聚合酶混合物的需要。由于5＇RACE系统的复杂性和单个基因特异性引物的使用（和锚定引物一起），使用Taq DNA聚合酶来扩增5＇末端片段长度受到限制，小于1.0kb。然而，最近PCR技术的进展使得可以PCR扩增的长度超过20kb。这种长PCR技术是基于在原来的热稳定聚合酶上，额外加有一定限量的带有3＇到5＇外切核酸
真香！用 qPCR 做外泌体研究，南京医科大学拿下 41 分 SCI
。 2）RNA 提取 外泌体 RNA 可以用专用的外泌体 RNA 提取试剂盒提取，也可以用 Trizol 法提取，建议 Trizol 与外泌体的体积比不小于 4:1（也可以用 Trizol 直接裂解外泌体沉淀）。 具体操作：取 200 μl 外泌体于 1.5 ml EP 管中，加入 800 μl Trizol 试剂，充分混合，裂解 10 min，12000 rpm 离心 10 min 取上清。 3）反转录 采用 Umibio 4× 预混型快速逆转录试剂盒：适用于长片段 RNA（如 mRNA、LncRNA
0-G1期峰的一个峰，死亡的细胞峰离G0-G1期峰较远，但是这种典型的结果似乎很难获得。有其它的替代方法，完全可以不用这种方法。晚期凋亡的细胞由于DNA的断裂，因而可以出现DNA ladder，从而也就有了经典的检测方法TUNEl。流式也能进行Tunel检测，其检测原理与经典Tunel原理基本一致。以BD公司的为例，其利用TdT能将荧光素标记的dUTP标记到断裂的DNA末端，从而使凋亡的细胞具有荧光。但是由于在细胞内标记，细胞需要进行固定处理，操作类似免疫组织化学法，容易造成假阳性。建议采用原装大厂
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