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- xuanya
- 中国/美国
- XY-TE-0595
- 2025年11月01日
企业认证
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温运输和保存
- 保质期：
两年
- 英文名：
TdT-Tailing DNA Probe Labeling Kit
- 库存：
890
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
本产品是基于TdT末端转移酶能够在DNA的3’端添加dNTP尾巴的原理而设计，该反应的示意图如下：
TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒本产品是在上述原理的基础上开发的，具有下列特点：
1.快速，15分钟即可完成标记反应。
2.不但可用于单链DNA和DNAOligo标记，还可用于3’突出的双链DNA标记，但后者标记效率稍低。
3.可用同位素底物和非同位素底物（生物素和Digoxin标记的核苷酸等）。
4.提供不带标记核苷酸、带生物素标记核苷酸和带Digoxin标记核苷酸三种选择。
5.同时提供非标记的dATP，用户可以用其调节加尾长短和标记核苷酸掺入比例。
6.标记的探针可用于电泳迁移率实验（EMSA）、原位杂交（ISH）、Northern Blot（不推荐用于低丰度RNA检测）、小RNA Northern、SouthernBlot（不推荐用于单拷贝基因检测）、菌落杂交、斑点印迹杂交分析等。
TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒运输及保存：
低温运输，-20℃保存，有效期一年
自备试剂：DNA模板
TdT加尾法DNA生物素标记试剂盒使用方法
1.在0.2mL微量离心管中按下表设置一个20uL体系的标记反应（如果需要标记更多探针，请增加标记体积而不要增加探针DNA的浓度）：
2.37℃反应15分钟，延长到30分钟也可以。如果没有非标记核苷酸存在，一般可以加尾3-5个Biotin或DIG标记的核苷酸（标记物空间阻碍抑制延长）；如果有在加尾反应中加入一定比例的非标记核苷酸dATP（其他dNTP也可，只是本试剂盒只提供dATP而已），每条探针上可加上约100个核苷酸，平均含5个标记核苷酸
3.70℃10分钟灭活TdT酶。
4.如果需要，可以PAGE电泳+银染（相关试剂需要另购）检测标记效率，带标记的探针泳动速度将低于没标记的探针。
5.如果是非同位素标记，探针不需纯化可以直接用于杂交。如果需要纯化非同位素标记的探针，请不要酚/氯仿抽提，因为非同位素标记物一般会使探针DNA进入有机相而丢失。
6.使用时需将探针以1-8ng/uL的终浓度加入到杂交液中（如果探针是双链DNA，加入前还需热变性）。如果不立即使用，非同位素标记的探针DNA可-20℃长期放置一年，同位素标记的探针DNA不能放置。
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文献和实验直标法因为Cy5标记效率低而导致Cy3、Cy5两种颜色信号强度不同的现象。试剂盒提供除荧光染料外的全部试剂，足够作10次标记。 6）Vysis公司的Microarray Nick Translation Kit 是配合Vysis公司的Genomic Microarray--AmpliOnc I Microarray的荧光标记试剂盒，采用缺口平移的方法将荧光标记的dUTP掺入纯化的样品基因组DNA中作为探针，和AmpliOnc I Microarray进行杂交。 除了厂家为自家的DNA
Chemiluminescent Hybridization & Detection Kit），即可组合出完整的非放射性检测分析系统。不过这个系统不适用于玻片基质的芯片的探针标记。 由于Atlas系列的DNA微阵列膜上每个点的核酸量有限，所以对标记探针的灵敏度要求非常高，一般情况下同位素是首选。如今Atlas SpotLight标记试剂盒特别提供逆转录所需的试剂，可以将2μg以上的mRNA或者50μg以上的RNA样品制备成生物素标记的单链cDNA探针，由于没有竞争性抑制，单链探针的灵敏度要大大高于双链探针。另外生物素标记
PCR过程。（2）SYBR荧光染料法：该方法利用了SYBR Green荧光染料非特异性与双链DNA结合并发光的特性，检测PCR的全部进程，从而判定初始RNA的量。 常用的miRNA第一链合成方法成熟的miRNA大小只有22nt左右，在用实时荧光定量PCR检测miRNA时，难点在于如何识别如此小的miRNA并合成第一链。目前常用的用于识别并合成miRNA第一链的方法主要有颈环法和加尾法两种。（1）颈环法原理图（2）加尾法原理图由于成熟miRNA较小，无法用常规的方法直接进行反转录、PCR
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