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- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
55
- 英文名:
大提柱式质粒 DNAout
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海邦景
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
10 次
1)大提柱式质粒 DNAout 10 次说明书客户提供材料
2)提取基因组RNA/DNA并确定其品质。
客户提供:
新鲜材料或正确保存条件下材料(组织、细胞、细菌等)
4℃保存一周,-20℃保存一个月,-80℃保存一年血液样品(EDTA,肝素,柠檬酸钠抗凝)
详细的背景资料:来源、特点、类型等
我们提供:基因组RNA/DNA提取、实验报告
质量保证:高纯度RNA/DNA、完整货期:3-5个工作日
以下是大提柱式质粒 DNAout 10 次说明书的详细介绍点击了解更多DNA纯化产品:

储存事项:
A. 大提柱式质粒 DNAout 10 次说明书在RNase A管和DNase I管分别加入1毫升的裂解缓冲液吹打,颠倒混匀,充分溶解RNase A和DNase I后,按照每次使用量分装-20℃冻存,有效期6个月。
B. 结合液LB低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
C. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
注意事项:
1. 大提柱式质粒 DNAout 10 次说明书组织和细胞取材速度要快,在获取后应当尽快浸入RNAwait,以防止RNA降解。
2. 冰冻组织不能用RNAwait保存,因为RNAwait不能有效渗入冰冻组织。
3. 保存样品的RNA提取:样本从-20℃或-80℃冰箱取出后,复苏到室温后,取出组织块,再用于提取RNA。细胞样本则复温后低速离心收集细胞,去除RNAwait,再用于提取RNA。后继的处理(如组织匀浆)可以在室温下进行,不必在液氮中操作,RNA仍能有效得到保护。残留少量RNAwait保存液不影响后继提取RNA的质量。
实验步骤:
(1) 大提柱式质粒 DNAout 10 次说明书实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可!固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的:(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚:(25:24:1)抽提两次,:(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量
(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验今天这篇干货指南,将精准拆解质粒大提的高频翻车点,逐一破解实验难题,手把手教你拿下高产、高纯、低内毒素的“三好”质粒! 菌体培养:把控源头,从根源避免产量短板 菌体是质粒的载体,培养阶段的细节把控直接决定菌量多少,是保障质粒产量的基础。培养时间过短,菌体增殖不足,质粒基数不够;培养时间过长(如超过 16–20 h),菌体进入衰亡期、自溶甚至死亡;部分不稳定质粒(如含毒性插入片段、大片段或重复序列的质粒)可能出现丢失,导致最终得率下降。 菌液
“明明按protocol操作,提出来浓度低得离谱?” “跑胶一条带严重拖尾,基因组污染清晰可见?” “转染细胞死一片,查来查去发现是内毒素超标?” 这些场景是不是似曾相识?质粒大提(Maxiprep)作为分子生物学和细胞实验中的核心环节,其产量与纯度直接决定着下游酶切、测序乃至转染的成败。大提与小提原理相通,但菌液量大、操作环节多,每个细节的偏差都可能被放大成“翻车事故”。从摇菌到洗脱,从裂解到质检,每一步都藏着容易被忽视的“隐形杀手”——而大多数说明书不会告诉你这些。 下面从摇菌到洗脱
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技术资料暂无技术资料 索取技术资料










