石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒

特别提示：包括石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒
英文名称：Paraffin Embedded Tissues microRNA Extraction Kit

产品货号：石蜡包埋组织miRNA提取试剂盒
产品规格：50次

本试剂盒用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取RNA包括microRNA。独特的裂解液/蛋白酶K迅速裂解细胞释放出RNA，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， 最后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。得到的RNA可用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。

产品组分：
裂解液——————15ml
结合液——————25 ml
漂洗液——————10ml
蛋白酶K——————20mg（可选）
RNase-free H2O——————10ml
基因组DNA清除柱和收集管——————50套
RNA吸附柱和收集管室温——————50套

产品特点：
1.完全不使用有毒的苯*(代"酚")，氯*(代"仿")等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。
2.快速，简捷，单个样品RNA提取操作一般可在1小时内完成。
3.试剂盒的独特基因组清除柱和配方确保有效清除基因组DNA残留，一般情况下得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR等实验。
4.多次柱漂洗确保RNA高纯度，可直接用于下游各种实验。

注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量绝对不要超过基因组DNA清除柱和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。不同组织细胞种类RNA/DNA相差极大，例如胸腺脾脏DNA含量丰富，超过5mg就会超过柱子处理能力。COS细胞RNA含量丰富，超过3x106细胞就会超过柱子吸附能力。所以开始摸索实验条件时，如果不清楚样品DNA/RNA含量时宁可使用较少的样品处理量，如不超过2个10μm厚度石蜡切片。将来根据样品试验情况增加或者减少处理量。
3. 裂解液PKD、结合液RBC中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 预防RNase 污染，应注意以下几方面：
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA提取过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase 的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）
5. 关于DNA 的微量残留：
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到100%无残留），本试剂盒采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术，绝大多数DNA 已经被清除，可直接用于反转录PCR 和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
6. RNA 纯度及浓度检测：
完整性： RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE 电泳缓冲液；150v，15 分钟)检测完整性。由于石蜡包埋组织福尔马林固定和包埋过程中一般由于RNA 与蛋白反应交联会导致RNA 断裂或者降解，一般电泳后UV下只能看到模糊弥散（smear）带型，随着储存的时间越长，降解断裂越严重，甚至只能看到峰值仅仅在100bp 左右的模糊条带。这都属于RNA 提取正常情况。
纯度：OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的参考指标。高质量的RNA，OD260/OD280 读数（10mMTris, pH7.5）在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品，假定在10mM Tris，pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。
浓度：取一定量的RNA 提取物，用RNase-free 水稀释n 倍，用RNase-free 水将分光光度计调零，取稀释液进行OD260, OD280 测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：终浓度（ng/μl）= (OD260)×(稀释倍数n)×40。

储存条件：室温，有效期9个月。

本制品别名：石蜡包埋组织microRNA提取试剂盒|石蜡包埋组织microRNA分离试剂盒|石蜡包埋组织microRNA纯化试剂盒|石蜡包埋组织miRNA分离试剂盒|石蜡包埋组织miRNA纯化试剂盒|石蜡包埋组织总RNA提取试剂盒|石蜡包埋组织总RNA纯化试剂盒

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名称：非冻型组织RNA保存液
货号：BTN3060
规格：250mL
本RNA保存液是一种在较高温度下保存RNA样品的非冻型无毒溶液，它能迅速渗入细胞内，通过高效抑制 RNase的活性而保存RNA的完整性。

产品特点：
1. 操作简单，将组织剪薄浸没在RNA保存液中即可使其RNA不被降解。
2. 替代液氮，使样品的保存不需液氮，干冰或-80℃冰箱，尤其适用于临床和野外样品的快速和大规模采集。
3. RNA完整，因本产品能迅速抑制组织中RNA酶的活性，故从中提取的RNA的质量跟液氮保存的样品相比不相上下。
4. 方便运输，处理过的样品能在 25℃保存一周，使样品邮寄和运输变得容易和便宜，有利学术合作和交流。
5. 反复冻融，经本产品处理的样品可反复冻融20次，其间可对样品进行各种处理而不影响最终提取的RNA的质量。
6. 结果准确，本产品进入细胞十分快速，基因表达在发生应急改变前就得以锁定，故RNA分析更能反映取样时的真实情况。
7.可比性强，本产品能减少大规模样品处理中的误差，增加各次实验数据间的可比性，对大规模基因表达谱的分析尤其有用。
8. 兼容性广，虽然处理过的样品可以使用动物RNA提取试剂盒和TRIzol等试剂提取其RNA，样品还可直接用于组织切片，免疫学和流式细胞分析而不影响RNA提取的质量。

储存条件：常温运输及保存，有效期二年。

使用方法：

一：用本产品保存新鲜组织样品
1. 估计完全浸没样品所需要本产品的体积(1g组织需10mL)。
2. 标记收集管并加入估计所需量的本产品。
3.以最快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。
注: 鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切而直接放入本产品中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。
4. 将组织碎块完全浸没于收集管的本产品中。
5. 将收集管存放于温度适当的地方，存放时间不能超过该温度下的最长存放时间，如果要存放在-20℃或-80℃，需先将样品在 4℃放置过夜后再转移到最后的温度。注：将样品转移到-20℃或-80℃前，需要倒弃保护液。常见存放温度与其最长存放时间关系为如下：

保存温度	时间及效果
37℃	一天(保存三天的样品 RNA有部分降解)
18-25℃	一周(保存两周的样品 RNA有轻微降解)
2-8℃	一个月
-20℃和-80℃	长期

6.从存放处取出样品(-20℃或-80℃保存的样品需先在室温下融化)，用消过毒的镊子将组织碎块从保护液中取出。
7. 立即开始RNA提取或进行其他处理(如将样品分割成更小的碎块再重新保存等)。注:样品可以反复冻融二十次而其 RNA 质量不会受到影响。

二：本产品保存培养细胞、悬浮细胞、细菌和RNA 病毒
1. 标记收集管。
2. 将待样品转移到离心管中，离心收集细胞，弃上清。注:处理含病毒的样品(如血浆)可直接从步骤第4 步开始。
3. 用冰浴的缓冲液洗一次。
4. 将细胞悬浮在少量缓冲液中。
5. 加入五到十倍体积的本产品，混均; 对病毒样品，加入两到三倍体积的本产品，混均。
6. 将收集管存放于温度适当的地方，存放时间不能超该温度下的最长存放时间。
如果要存放在-20℃或-80℃，需先在4℃放置过夜后再转移到最后温度条件(将样品转移到-20℃或-80℃前，需要倒弃保护液)。注:样品存放温度与其最长存放时间关系为如下：

保存温度	时间及效果
37℃	一天(保存三天的样品 RNA 有部分降解)
18-25℃	一周(保存两周的样品 RNA 有轻微降解)
2-8℃	一个月
-20℃和-80℃	长期

7. 取出样品，室温下融化(-20℃或-80℃保存的样品需先在室温下融化)。
8. 加入一倍体积的预冷的缓冲液(如PBS)，用常规离心法收集细胞并用缓冲液洗一次。病毒样品可免去此步骤。
9.细胞直接用于RNA的提取或其他处理。