JM110化学感受态细胞

特别提示：包括JM110化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：JM110化学感受态细胞
英文名称：JM110?Chemically Competent Cell
产品货号：MQ0007
产品规格：10×100μl/50×100μl

JM110菌株具有硫酸链霉素抗性(StrR)；是甲基化基因dam、dcm 缺失的菌株，提取得到的质粒DNA，可被对dam、dcm甲基化敏感的内切酶切割；lacIq lacZΔM15的存在使JM110可以进行蓝白斑筛选，但转化效率不高，JM110感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率约107 cfu/μg。一般不用于质粒构建，只适用于质粒转化。
保存条件：-80℃
基因型：
rpsL(Str R)thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB)/F′[traD36 proAB lacIq lacZΔM15]
操作说明：
1.JM110感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中)，加入目的DNA并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。

除了JM110化学感受态细胞,，我公司还供应以下相关产品：



名称：即用型蓝白T载体C型(T7-T3，无MCS)
货号：BTN120513
规格：20次
本产品是用Xcm I酶切线性化的DNA片段，其两个末端的5′都有一个突出的T，可以用于快速克隆具有加尾活性的耐热酶(如Taq DNA聚合酶)扩增得到的PCR片段。

产品特点：
1. 由于是通过酶切制备，所以载体两端的带T率为100%，远高于用Taq DNA聚合酶和TdT末端转移酶在平末端载体加尾得到的T载体。
2. 克隆的阳性率一般在90%以上，缩短了筛选过程。
3. 无Nde I和Nco I等多克隆位点，便于重组基因的克隆
4. 来源于pBlueSoript Ⅱsk(+)，故克隆位点两侧分别有T7和T3 RNA聚合酶启动子，便于用克隆的PCR片段制备RNA探针。
5.可以使用pUC/M13 Forward和Reverse测序引物测定插入片段的序列。
6. T克隆位点位于β-半乳糖苷酶的α肽编码区内，可以进行蓝白斑筛选。
7.含有丝状噬菌体f1复制起始子，可以制备单链DNA。

产品组成：

组分	规格
即用型蓝白T载体C型(10ng/μL)	60μl
阳性对照(35ng/μl)	30μl

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期两年。

质粒图谱


名称：Rosseta(DE3)感受态细胞
货号：SY0016
规格：10×100μl
本品是在具有大肠杆菌BL21菌株基础上制备的化学转化感受态细胞，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子（AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA）对应的tRNA，提供外源基因（尤其是真核基因）在原核系统中的表达水平。经pUC19质粒检测，转化效率可达10^7 cfu/μg。本品具有氯霉素抗性。

注意事项

1）感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用，避免反复冻融。
2）待转化DNA加入感受态细胞后，请勿用移液枪吹打，轻轻弹匀即可。
3）为确保最高效率转化，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
4）本品应于-80℃保存，请勿将感受态细胞储存于-20℃或液氮中保存。
5）整个转化过程请于无菌条件下操作。
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）将感受态细胞从-80℃中取出，置于冰水浴中融化。
2）将待转化DNA加入到100 μl感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
① 通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和；
② 待转化DNA加入体积不要超过感受态细胞体积的1/10。
3）42℃水浴，不要晃动，准确热激45s后，立刻置于冰水浴中，静置2-3分钟。
4）向离心管中加入900 μl 不含抗生素的LB或SOC培养基，混匀。
5）150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
6）取适量已转化细胞，加到含相应抗生素的固体培养基上，轻轻涂匀。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。
【注】：如菌体量较少，也可2,500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。
7）室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。

储存条件：-80℃

名称：Rosetta-gami(DE3)pLysS化学感受态细胞
货号：MQ0044
规格：10×100μl/50×100μl
Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株聚合了不同原核表达菌株的优势：
Rosetta-gami赋予其Rosetta和Origami的优点——补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子(AUA，AGG，AGA，CUA，CCC，GGA)对应的tRNA，提高外源基因的表达水平，并且包含突变的硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase)(trxB)和谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)(gor)基
因，表达主要还原途径的两个关键酶。有利于形成正确折叠的含有二硫键的蛋白，增强蛋白的可溶性。
该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)，适合 T7启动子诱导的蛋白表达。
该菌株携带的pLysS质粒含有表达T7溶菌酶的基因，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株具有卡那霉素，氯霉素，链霉素，四环素抗性，经pUC19质粒检测转化效率高达108cfu/μg。
保存条件：-80℃
基因型：
Δ(ara-leu)7697ΔlacX74phoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F[lac+lacIqpro]gor522::Tn10 trxB pLysSRARE2(CamR，StrR，TetR)
操作说明：
1.取100μl冰上融化的Rosetta-gami(DE3)pLysS感受态细胞，加入目的质粒并轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42 回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白，最佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
6.BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。
7.具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性质粒的表达。