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汉坦病毒通用PCR检测试剂盒说明书

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  • 上海莼试
  • CP912986
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  • 2025年07月09日
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    • 英文名

      Hantanvirus(HTV)RTPCR

    • 保质期

      详见说明书

    • 供应商

      上海莼试

    • 保存条件

      低温冷藏

    • 规格

      详见说明书

    需要自备的器材:点击了解更PCR检测试剂盒
    1.汉坦病毒通用PCR检测试剂盒说明书仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 µL、20
    µL、200 µL、1000 µL)。
    2.耗材:荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦(DEPC)水
    处理的灭菌离心管、吸头(10 µL、200 µL、1000 µL)、灭菌双蒸水。
    产品名称 汉坦病毒通用PCR检测试剂盒说明书
    英文名称 Hantanvirus(HTV)RTPCR
    编号 CP912986
    产品细节图片1
    特点:
    1.汉坦病毒通用PCR检测试剂盒说明书即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速。
    2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp。
    3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
    4. 提供阳性对照,便于分析试验结果。注意事项:
    1.基础程序;
    2.扩增温度和延伸温度;
    3.反应时间;
    4.循环次数;
    5.PCR 反应液的配制;
    6.PCR技术的基本原理;
    7.PCR的反应动力学;
    8.PCR扩增产物;
    9.PCR反应体系与反应条件。
    反应五要素:
    汉坦病毒通用PCR检测试剂盒说明书参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
    引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
    ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
    ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
    ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
    ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
    ⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
    ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
    ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
    引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以最低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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    槲皮甙 CAS 522-12-3 订购|咨询 规格:HPLC≥98%,20mg/vial
    石榴皮鞣素 CAS 65995-64-4 订购|咨询 规格:HPLC≥98%,10mg/vial
    洋川芎内酯A CAS 62006-39-7 订购|咨询 规格:HPLC≥98%,50mg/vial
    alpha-香附 CAS 473-08-5 订购|咨询 规格:HPLC≥98%,20mg/vial
    白绵马素AP CAS 59092-91-0 订购|咨询 规格:HPLC≥98%,20mg/vial
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    使用方法:
    注:所有试剂使用前需完全解冻,混合均匀,6,000rpm离心数秒后使用。
    1.汉坦病毒通用PCR检测试剂盒说明书 样本处理(样本处理区)
    待检样本的核酸提取可采用病毒RNA提取试剂盒或自动化核酸提取仪等,具体提取方法请参照相关说明书;阳性质控品及阴性质控品无需提取,可直接使用。
    2. 扩增试剂准备(PCR前准备区)
    N个(N=阴性质控品+待检样本+阳性质控品)PCR反应管,每管分别加入FMD RT-PCR反应液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根据每头份用量计算N+1份FMD RT-PCR反应液、RT-PCR酶所需总量,两者混匀离心后分装20 μl至单个PCR反应管)。
    组分每头份用量FMD  RT-PCR反应液19 μlRT-PCR酶。
    1 .将所有PCR反应管于6,000rpm离心30s,转移至样本处理区。
    2.加样(样本处理区)
    3.在上述的PCR反应管中分别加入待检样本RNA提取物、阴性质控品和阳性质控品各5 μl,盖紧管盖,于6,000rpm离心10s,转移至扩增区。

     

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